富氢水后处理对大鼠肠套叠缺血再灌注损伤的保护作用研究

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背景:  肠套叠是小儿外科常见疾病之一,它是指一段肠管及肠系膜套入相邻肠管内引起肠梗阻。相邻的肠管套叠后会引起肠组织循环障碍造成肠组织的缺血,肠套叠复位后被压迫的血管开始充盈称为是再灌注。因此肠套叠复位后可以引起肠组织的缺血再灌注。在临床上有很多疾病可以引起肠的缺血再灌注损伤,如各种疾病引起的急性大出血、肠套叠、大面烧伤、肠梗阻及肠系膜血管栓塞等疾病。如何才能有效的减轻这种缺血再灌注的损伤,成为医学界研究的热点。首先氧化应激的损伤在肠套叠的肠缺血再灌注损伤中是最主要的损伤,其次肠缺血再灌注后肠粘膜屏障被破坏,一些内毒素及细菌群紊乱激活了网状内皮系统发生一系列反应,导致大量相关炎性细胞因子及介质的释放。小肠组织被炎症因子浸润引起肠道上皮细胞大量的凋亡。很多研究证明,氢气具有抗氧化性,其原理是它可以选择性地清除细胞毒性的氧自由基,并具有抑制炎症因子释放作用。将氢气融入生理盐水中制备成富氢水也具有氢气的抗氧化作用。许多学者做了富氢水在脑、冠脉等部位缺血再灌注损伤防护方面的研究。而富氢水对肠套叠缺血再灌注损伤有无保护作用尚未见报道。  目的:  本实验以SD大鼠制作肠套叠的模型为研究对象,研究富氢水干预对肠套叠引起的缺血再灌注损伤是否起保护作用。  方法:  将90只SD大鼠采用随机分配的方法分为3组(n=30)。分别为假手术、肠缺血再灌注加生理盐水治疗组、肠缺血再灌注加富氢水治疗组。假治疗组(N=30)给予开腹手术暴露肠管,不做肠套叠处理。缺血再灌注组(N=30)给予开腹做肠套叠模型处理,套叠8小时后复位,立即给予腹腔注射生理盐水,1小时候取材。缺血再灌注加生理盐水组(N=30)和缺血再灌注组加富氢水腹腔注射治疗组(N=30)除试剂外与其他组同样平行处理。富氢水治疗组在肠道缺血8小时复位立即给予腹腔注射富氢水再灌注1小时后,经原切口进入腹腔取材(剂量为5ml/kg1.d1)。  结果:  1、HE染色病理结果:假手术组肠粘膜未受损伤,缺血再灌注加生理盐水组肠粘膜受损最明显,缺血再灌注加富氢水组较生理盐水组肠粘膜明显减轻。  2、炎症因子:血清中TNF-α、IL-1β假手术组血清中含量最低,缺血再灌注加生理盐水组含量最高,而缺血再灌注加富氢水组含量较生理盐水组明显减低。  3、氧化指标:血清中 MDA在假手术组含量最低,缺血再灌注加生理盐水组含量最高,缺血再灌注加富氢水组含量较生理盐水组明显降低,而SOD在假手术组含量较最高,缺血再灌注组加生理盐水组含量最低,缺血再灌注加富氢水组较生理盐水有明显提高。  4、免疫组化:用 TUNEL法检测细胞凋亡,假手术组有少量的细胞凋亡,缺血再灌注生理盐水组有大面积的细胞凋亡,缺血再灌注加富氢水组较生理盐水组比较细胞凋亡有明显减轻。  结论:  1、富氢水在肠套叠缺血再灌注损伤中有明显的对抗作用,主要表现在减轻肠道组织的病理损伤、减少和降低炎症因子的表达、减少炎性细胞的浸润、减少肠道组织中自由基的氧化应激损伤以及抑制肠道上皮细胞(主要为小肠绒毛细胞)的凋亡。  2、本实验应用腹腔内注射富氢水的方法,为肠缺血再灌注损伤的防治提供了新的策略和方向。
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