论文部分内容阅读
目的 蛋白质酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase，PTK)是一类催化ATP上γ-磷酸转移到蛋白酪氨酸残基上的激酶，能催化多种底物蛋白质酪氨酸残基磷酸化，在细胞生长、增殖、分化中具有重要作用，参与多种信号转导过程。c-Yes与c-Src是蛋白质酪氨酸激酶Src家族的两个代表性成员，两者具有广泛的同源性，但与c-Src的广泛研究相比，对c-Yes的研究显得非常不足。已有的报道说明在很多情况下两者功能作用并不相同。同时，v-Yes诱导细胞转化的能力激发了对其正常细胞同源物c-Yes的研究兴趣，因为可以推测c-Yes很可能与人类癌症的发生发展有关。现有的证据表明c-Yes和多种恶性肿瘤，如大肠癌、乳腺癌和恶性黑色素瘤等，有相关性，但目前有关c-Yes在肝癌中的表现还未见报道。本研究通过临床资料结合实验室研究，检测c-Yes在人和实验动物的肝癌组织中的表达是否增加，并探讨其意义。 方法 选择12月龄LEC大鼠和WISTAR大鼠，手术取肝脏标本。LEC大鼠用肉眼判断癌部与非癌部，分别做HE染色和无染色切片。WISTAR大鼠肝脏标本用做正常对照。LEC大鼠的癌部与非癌部，WISTAR大鼠肝组织分别用lysis buffer研磨提取蛋白，-80℃保存。临床手术中得到的肝癌病人肝组织标本，同样分为癌部和非癌部，分别提取蛋白和做组织切片。蛋白提取液用BIORAD公司蛋白分析液和日立公司分光光度仪测定浓度。将相同质量的蛋白提取液用于SDS－PAGE电泳，用Western Blot方法分别检测LEC大鼠和人的肝组织中cJes的含量，并用图像分析软件做定量比较。Western Blot和免疫组化染色的抗体均采用BDTra us8notion动山oratories公司的c－Yes单克隆抗体。免疫组化染色采用ABC和TSA试剂盒，标本来自香）门医科大学第三内科既往肝癌、肝硬化、慢性肝炎病例的组织切片。 结 果 LEC大鼠及人类肝癌患者的癌部一非癌部的对比研究显示：癌部的cles蛋白表达要明显高于非癌部，在大鼠研究中，非癌部的c了es表达又明显高于正常对照wistal大鼠肝脏。经图像分析软件的分析，人类肝癌患者的癌部 cses含量是非癌部 3．1812．85倍。两组数据经配对t检验，p＜0．05，有统计学意义，可以认为癌部的c了es含量高于非癌部。在免疫组化的研究中，我们进一步证实了这个结论。人类患者和动物模型的癌部组织的染色均明显强于非癌部。在慢性肝病患者的组织标本中，染色程度按正常肝组织、慢性肝炎、肝硬化、肝癌的顺序逐渐加深。 结 论 在人类肝癌患者和LEC大鼠的肝组织中，cIes在癌部的表达要明显高于非癌部，在慢性肝炎、肝硬化、肝癌中呈递增趋势，这意味着在从正常肝组织、慢性肝炎、肝硬化向肝癌发展过程中，C－Yes有可能是一种必需的相关因子。从另一方面来看，肝细胞癌也可以成为研究c1es在细胞转化过程中功能的一个新的模型。