论文部分内容阅读
目的：分析耐唑类药物白假丝酵母菌临床分离株ERG11基因的变异。方法：纸片扩散法初步筛选临床分离耐唑类药物的白假丝酵母菌,采用美国临床实验室标准化协会(CLSI)公布的《酵母菌液基稀释法抗真菌药物敏感试验参考方案》(M-27方案)测定初筛耐药株对氟康唑和伊曲康唑的MIC,随机选择10株白假丝酵母菌耐药株(FLC≥64ug/ml, ITC≥1ug/ml)和5株敏感对照株(FLC MIC≤8ug/ml, ITC MIC≤0.125ug/ml)。纯培养扩增目的菌株,提取其基因组DNA。利用DNASTAR软件辅助设计三对PCR引物。以提取的目的DNA为模板,分别从前(ERG11.1)、中(ERG11.2)、后(ERG11.3)三段扩增ERG11基因全序列,并使三段产物的引物扩增片段相互重叠,以保证序列的准确性。扩增后的PCR产物经纯化后测序,将测序结果与GenBank中已知标准序列(X13296)进行比较分析。结果：电泳图像显示,获得的三段PCR产物大小与预期结果一致。测序结果表明,成功获得了15株白假丝酵母菌ERG11全基因序列。与GenBank中标准株序列(X13296)比较表明,耐药株都存在同义突变和错义突变；而敏感株只有同义突变。共有28个碱基突变位点,其中,有15个位点是错义突变。与以往报道相同的突变位点有10个,F72L、F105L、D116E、A117G、Y132H、E266D、V437I、G464S、R467K和E488I,而其余五个位点F126L、I166N、H183Q、S453F和N490K未见报道。结论：耐唑类抗真菌药物的白假丝酵母菌ERG11基因有多个发生错义突变的位点,某些位点的突变可能与其耐药性的发生相关。其中5个新发现的突变位点在其耐药性中的意义尚需进一步研究。