柑橘木虱对两种杀虫剂敏感性检测及内共生菌分析

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柑橘木虱(Diaphorina citri Kuwayama)属半翅目Hemiptera,木虱科Psyllidae,主要危害芸香科植物。该虫不仅通过吸食寄主叶片对其造成直接伤害,最严重的危害是能传播柑橘黄龙病,给柑橘产业造成严重的经济损失。柑橘木虱的防治长期以化学防治为主,尤其是噻虫嗪和吡虫啉等新烟碱类杀虫剂在柑橘木虱防治上被广泛利用,使得柑橘木虱对此类药剂已产生不同程度的抗药性。目前,在柑橘木虱对杀虫剂的抗性机理研究上的报道还较少。本研究采集了广州新芳、郴州永兴和永州江永三个柑橘木虱地理种群,进行了三个柑橘木虱种群对噻虫嗪和吡虫啉的敏感性检测,研究了柑橘木虱对吡虫啉抗性品系和相对敏感品系5个P450基因的表达变化,以及16S rDNA扩增子测序分析了三个柑橘木虱吡虫啉抗、感品系间内共生菌种类及含量的差异,为深入研究柑橘木虱对吡虫啉等新烟碱类杀虫剂的抗性机理奠定基础。1、三个不同柑橘木虱地理种群对噻虫嗪和吡虫啉杀虫剂的敏感性检测通过生物测定的方法,对广州、郴州和永州三个柑橘木虱地理种群进行新烟碱类杀虫剂噻虫嗪和吡虫啉的敏感性检测,三个柑橘木虱种群对杀虫剂敏感性差异较大,通过LC50的比较,广州柑橘木虱地理种群相对敏感性较高;郴州地区柑橘木虱种群对噻虫嗪的LC50是广州地区的3.85倍,处于敏感性下降状态;对吡虫啉的抗性为5.16倍,处于低水平抗性阶段;永州柑橘木虱对噻虫嗪和吡虫啉的抗性倍数分别是2.18倍和2.66倍,处于敏感状态。从结果来看,柑橘木虱对杀虫剂不同程度敏感下降现象表明这些地区柑橘木虱有潜在发展为抗性的风险。2、田间柑橘木虱抗、感品系P450基因的相对表达量研究本研究通过荧光定量PCR发现田间柑橘木虱吡虫啉抗性品系中5个P450基因CYP4C67、CYP4C68、CYP4DA1、CYP4DB1和CYP4G70基因的表达量均有上调。致死中浓度LC50吡虫啉处理柑橘木虱12h、24h和48h后,5个P450基因表达量均上调。处理后12h基因的相对表达量最大,分别为对照组的4.27倍、1.77倍、1.47倍、1.20倍和1.36倍,24h后5个P450基因的相对表达量逐渐下降,药剂处理48h后,除CYP4C67基因的表达与对照组有显著差异外,其他4个P450基因的相对表达量与对照组无明显差别。3、不同抗性水平柑橘木虱种群体内共生菌差异分析昆虫体内微生物能诱导解毒酶的产生,从而使杀虫剂丧失毒性。本研究通过16S rDNA宏基因组测序,对广州相对敏感(G.a.1)、郴州低水平抗(C.a.1)、永州敏感下降(Y.a.1)3个不同抗性水平柑橘木虱种群体内共生菌进行分析。经统计得到物种分类的OTUs数目为6110。由等级聚类曲线显示,样品组之间微生物多样性大小为(C.a.1)>永州(Y.a.1)>广州(G.a.1)。3个样品微生物在属水平的丰度高低为C.a.1>Y.a.1>G.a.1。在本研究中,葡萄球菌属(Staphylococcus)、乳酸菌属(Lactobacillus)、鲸杆菌属(Cetobacterium)、热芽孢杆菌属(Thermobacillus)和不动杆菌属(Acinetobacter)等菌落在郴州(C.a.1)种群中丰度明显高于广州(G.a.1)和永州(Y.a.1)两个种群。这些菌株类别的差异在昆虫抗药性形成过程中的作用以及其是否为对外源毒素具有降解能力的菌株,还需今后进一步深入研究。
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