论文部分内容阅读
[目的]观察受体酪氨酸激酶RON (the recepteur d’origine nantais)在非小细胞肺癌组织中的表达,探讨RON的表达与非小细胞肺癌临床病理特征(组织学类型、TNM分期、分化程度、性别和年龄)和预后间的相关性。观察小分子抑制剂Compound-1(CP-1)靶向抑制RON对非小细胞肺癌细胞浸润／转移能力的影响和下游PI3K/Akt、MAPK通路的干预,深入研究RON在肺癌浸润／转移中的作用机制。[方法](1)受体酪氨酸激酶RON在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义免疫组织化学染色法检测96例非小细胞肺癌患者手术切除后石蜡包埋标本和20例对照组癌旁肺组织RON的表达情况,其中肺鳞癌53例,肺腺癌43例。所有病例均选自2006-2008年在浙江大学医学院附属第一医院心胸外科肺癌住院病人手术切除标本。根据染色强度(即阴性、弱阳性、中等阳性和强阳性,得分为0-3)和阳性染色细胞比例(即＝10%、11%-30%、31%-50%、>50%,得分为0-3),当两者得分之和=3时判定为RON表达阳性。采用SPSS18.0软件包进行统计学分析。组间各数据资料采用χ2检验进行显著性分析,P<0.05为有统计学意义。Log-rank分析表达RON与预后的关系,并用Kaplan-Meier进行生存分析。(2)抑制受体酪氨酸激酶RON的活性对肺癌浸润／转移的影响及作用机制以高表达RON的非小细胞肺癌细胞系A549为研究模型,运用特异性抑制剂Compound-1(CP-1)靶向抑制RON的活性,Matrigel基质浸润实验检测细胞基质浸润能力的变化,以及划痕实验和Transwell实验分析迁移和穿膜能力的改变。Western Blot检测RON的下游信号通路PI3K/Akt、MAPK相关分子Akt、ERK蛋白质水平变化,磷酸化和去磷酸化,以及E-Cadherin、Vimentin的表达水平,深入研究RON调控肺癌浸润/转移的分子机制。[结果](1)RON的阳性表达表现为肿瘤细胞的胞浆及胞膜出现棕黄色或棕褐色的颗粒。非小细胞肺癌组织RON的阳性表达率为55.2%(53例/96例),而癌旁正常组织的阳性表达率为5.0%(1例/20例),两者相比RON的表达具有显著差异(p<0.001)。进一步分析RON的表达与非小细胞肺癌临床病理的关系,发现其与分型、分化程度、病理TNM分期相关(即p<0.05)：肺腺癌的表达率为74.4%(32例/43例),而肺鳞癌为39.6%(21例/53例),p=0.001；中-高分化的阳性率为46.6%(27例/58例),低分化的患者为64.8%(26例/38例),p=0.035；Ⅰ期肺癌RON阳性率为35.3%(6/17),Ⅱ期为42.1%(16例/38例),Ⅲ期为73.0%(27例/37例),Ⅳ期为100%(4例/4例),p=0.004。但在性别、年龄对比中无统计学意义,p值分别为0.737和0.327。对每例患者随访3年,最短生存时间为5个月。53例RON表达阳性的非小细胞肺癌患者中,死亡19例,总生存率为64.2%；而43例表达阴性的患者中只有11例死亡,总生存率为74.4%,两者比较p<0.05,提示RON的表达与肺癌患者的预后相关。(2) Matrigel基质浸润实验证实靶向抑制RON能够降低肺癌细胞A549的基质浸润能力。同时,划痕实验和Transwell实验显示,CP-1可以显著抑制A549细胞的迁移和穿膜能力。在RON调控肺癌浸润/转移机制的研究中发现,抑制RON的活性降低了Akt和ERK的磷酸化水平,并且间质细胞标记Vimentin向上皮细胞标记E-Cadherin表达转化,促进间质-上皮转化从而发挥抗肺癌转移的作用。与对照组相比,CP-1干预组各实验指标均具有统计学意义(p<0.05)。[结论]RON在非小细胞肺癌组织中的表达率显著高于癌旁正常肺组织,其阳性表达率与肺癌的组织学类型、分化程度、TNM分期相关,但与性别、年龄因素无关。并且RON表达阳性提示较差的临床预后。在体外细胞实验中发现,抑制RON的活性能够有效降低肺癌细胞的转移潜能。靶向抑制RON抗肺癌细胞的浸润/转移是通过抑制下游PI3K/Akt、MAPK通路的激活,下调间质细胞标记Vimentin的表达,提高上皮细胞标记E-Cadherin的蛋白水平,促进间质-上皮转化从而发挥抗肺癌转移的作用。提示RON可以成为抗肺癌转移的药物靶点。