【摘 要】
：
目的 本研究旨在利用PGE-1载体在细胞内产生短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)来诱导RNA干扰(RNA interference,RNAi),为基因功能分析提供新的实验手段。重组构建抑制
论文部分内容阅读
目的 本研究旨在利用PGE-1载体在细胞内产生短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)来诱导RNA干扰(RNA interference,RNAi),为基因功能分析提供新的实验手段。重组构建抑制多药耐药MDR1基因表达的shRNA真核表达载体系统,转染肝癌耐药细胞株SMMC-7721/ADM,BEL-7402/AMD,研究其对肝癌耐药细胞MDR1基因的逆转作用,以及对P-糖蛋白(P-gp)表达和功能的抑制作用。 方法 1.根据MDR1基因序列,按照shRNA的设计原则,设计两段21个碱基的MDR1特异性靶序列作为shRNA目标序列(sh-MDR1-1,sh-MDR1-2)。合成两对62nt含有编码短发夹RNA序列的寡核苷酸,双链退火后,克隆到经过BamHI和Xbal双酶切后的线性PGE-1载体的U6启动子的下游,使其定向重组,构建psh21-MDR1重组质粒。 2.重组质粒经过PCR、测序鉴定;采用脂质体转染方法,转染到耐阿霉素(ADM)的肝癌耐药细胞SMMC-7721/ADM,BEL-7402/AMD内;用MTT法测定细胞对化疗药物阿霉素的敏感性,流式细胞仪检测细胞膜表面P-gp表达和细胞内Rhdaming123(Rh123)的储留(P-gp功能试验),激光扫描共聚焦显微镜测定细胞内Rh123的分布。 结果 1.重组构建的psh21-MDR1载体经过PCR扩增后电泳分析以及测序鉴定,
其他文献
晚期头颈部鳞癌的治疗仍然面临巨大挑战。尽管传统的手术、放疗及化疗已取得了很大的进展.但晚期头颈部鳞癌的预后仍然较差,生物靶向药物为此带来了新的希望。他们无论是单药
针对在8086系统中只有关于模拟量到数字量的转换（简称A/D转换）的简单介绍，而具体实现却较少涉及的现象,对模数转换在8086系统中的具体仿真实现进行分析。仿真过程中需要用到的程
1病历摘要患者男，21岁，因面部暗红色丘疹、结节3月于2008年2月20日到本中心就诊。3月前无明显诱因面部出现多暗红色丘疹、结节，粟粒至绿豆大小，无自觉症状，皮疹可自行破溃结褐色痂
苏珊·桑塔格是美国声名卓著的当代批评家。针对20世纪文学领域滥用批评理论的现象,桑塔格在她出版的文集《反对阐释》中旗帜鲜明地提出“反对阐释”,并以此为核心提出了“新感受力”的主张。该理论一直是国内外学界的研究热点。相关研究成果主要集中在以“反对阐释”和“新感受力”为关键词的理论研究和单一的文学作品分析。然而,就其批评思想在文学作品中的具体实现及其现实的价值意义,学界还尚未展开充分研究。而“反对阐释
惩治腐败不仅是关乎党和国家生死存亡的政治问题,更事关国家刑法制度的完善和运行。近年来,随着我国《刑法》的不断修正,《刑法》对贪污贿赂犯罪的相关条文进行了修改完善,与
<正>在过去的发展历程中,中小学教育科研取得了长足的进步,对学校的改革与发展起到了极大的促进作用。但从当下来看,仍存在着一系列需要关注并予以解决的问题,主要集中在以下
目的:观察抑癌基因PTEN、P16 及癌基因Bcl-2、C-myc 的编码产物在NGM、CAG(GEDⅠ-Ⅱ)、CAG(GEDⅢ)及GC 中编码产物的表达及意义,从分子水平揭示四者的关系,提出临床治疗CAG
随着我国生态文明建设的全面开展,生态摄影成为一个重要研究领域。在媒体融合的时代,生态摄影的传播有助于人们更新生态观念、转变生产生活方式和促进生态保护工作的顺利进行,从而有助于经济建设、政治建设、文化建设、社会建设、生态文明建设“五位一体”的全面发展。本文以生态摄影为研究对象,主要研究了三个方面:其一论述了生态摄影的发展历程及研究现状;其二探讨了生态摄影的基本理念,对生态摄影的内涵及外延进行了界定,
糖尿病肾病(diabetic kidley disease,DKD)是糖尿病最严重的慢性微血管并发症,已成为导致终末期肾病的主要原因,其发病机制涉及多种方面。研究表明[1,2],自噬是细胞生长发育
图作为一种通用的数据结构,正在越来越多地被用来建模科学数据,随着大数据时代的到来,各类图数据的的规模也日趋复杂和庞大。如何在这些庞大的图数据信息中发现那些不合理的