论文部分内容阅读
目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)DNA卵细胞载体,检测HBsAg(+)乙肝患者卵巢组织中HBV DNA的存在。 方法:用分子生物学技术提取、分离小鼠卵细胞,进行质粒PBR322-HBV DNA的脂质体转染,采用单细胞巢式PCR检测卵细胞中携带的HBV DNA;用荧光原位杂交技术(FISH)检测乙肝患者卵巢组织石蜡切片中是否存在HBV DNA。 结果:①提取小鼠卵细胞200个,其中对180个进行脂质体转染,其余20个卵细胞未进行脂质体转染(空白对照);200个卵细胞均行巢式PCR,在转染的卵细胞中检测的HBV DNA的阳性率为69.4%(125/180),未转染的20个卵细胞均未检测出HBV DNA。另取30份转染后经DNaseⅠ处理的卵细胞清洗液,进行PCR检查,HBV DNA阳性率为10%(3/30)。脂质体转染的卵细胞与空白对照,脂质体转染的卵细胞与清洗液中HBV DNA检出率均有显著差异(P<0.01),而空白对照与清洗液的HBV DNA检出率差异无统计学意义(P>0.05)。②采用荧光原位杂交技术检测卵巢组织中HBV DNA,20例HBsAg(+)乙肝患者卵巢组织石蜡切片中的阳性检出率为70%(14/20),20例HBsAg(-)正常对照组中未检测到HBV DNA。统计学分析结果显示:HBsAg(+)乙肝患者实验组与正常对照组HBV DNA检出率有显著差异(P<0.01)。 结论:①用阳离子脂质体转染卵细胞,证明HBV DNA可以通过脂质体转染进入卵细胞,卵细胞可以作为HBV DNA的载体;②以卵巢组织作为实验材料,采用荧光原位杂交的方法,证明在HBsAg(+)的乙肝患者患者的卵巢组织中存在HBV DNA, HBV DNA在肝外组织卵巢中存在。