论文部分内容阅读
嗜铬粒蛋白A是存在于多种动物内分泌组织和神经内分泌细胞内嗜铬颗粒中的一种酸性糖蛋白，其N端衍生多肽CGA-N46且具较高抗白假丝酵母活性，是一种具有研发价值的新型肽类抗真菌药物。为提高CGA-N46基因工程表达量，本研究以“SD序列+起始密码子+CGA-N46编码序列+终止密码子”为外源片段，利用一对同尾酶NheⅠ和SpeⅠ，以pEASY-Blunt为克隆载体，构建了一、三、五、八拷贝CGA-N46基因的重组载体pT-CAN46、pT-3CAN46、pT-5CAN46和pT-8CAN46；将不同拷贝数CGA-N46基因亚克隆至pET-30a，构建了一、三、五、八顺反子重组表达载体pET-CAN46、 pET-3CAN46、pET-5CAN46和pET-8CAN46；利用感受态转化法转化大肠杆菌Rosetta，获得大肠杆菌工程菌Rosetta（pET-CAN46）、Rosetta（pET-3CAN46）、Rosetta（pET-5CAN46）和Rosetta（pET-8CAN46），并进行了表达研究。SDS-PAGE电泳结果可知，在IPTG诱导下，一、三、五、八顺反子重组表达载体均能表达目的蛋白，并以周质方式进行表达，其中五顺反子的表达量最高。本论文研究结果为CGA-N46的深入研究奠定了基础。