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MiRNA-324-3p通过靶向下调MC1R基因及其下游黑色素合成相关基因的表达水平,减少黑色素的合成。α-黑素细胞刺激素(α-MSH)是一种重要的神经内分泌激素,通过与其天然受体MC1R结合,影响黑色素的合成。miRNA-324-3p和α-MSH均可以通过调控MC1R基因在羊驼黑色素细胞产生黑色素过程中起到非常重要的作用,然而当二者同时作用于黑色素细胞时,究竟如何影响黑色素细胞内黑色素的形成尚未见报道。为了研究miRNA-324-3p与α-MSH对羊驼黑色素细胞黑色素生成和增殖的影响,探索二者在羊驼黑色素细胞黑色素生成过程中的调控作用,本研究设立三个试验组,即转染组(只转染miRNA-324-3p)、添加组(只添加一定浓度α-MSH)、转染和添加组(转染miRNA-324-3p,同时添加α-MSH),并设立对照组(普通培养基)。应用qRT-PCR、western blot检测各实验组和对照组黑色素细胞内相关基因(MC1R、Mitf、Tyr、Tyrp2)的表达水平,并用酶标仪检测各组黑色素的A475吸光值,四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法测定各组黑色素细胞增殖率。主要实验结果如下:1.用qRT-PCR检测各组基因在mRNA水平的表达量,结果为:与对照组相比,转染组、添加组和转染添加组中,MC1R mRNA表达量分别是对照组的0.42倍、2.81倍、1.43倍,差异极显著(P<0.01);Mitf mRNA表达量分别是对照组的0.70倍、1.86倍、1.40倍,差异极显著(P<0.01);Tyr mRNA表达量分别是对照组的0.27倍、1.50倍、0.90倍,差异极显著(P<0.01);Tyrp2 mRNA表达量分别是对照组的0.65倍、3.33倍、1.70倍,且差异极显著(P<0.01)。转染添加组中MC1R、Mitf、Tyr、Tyrp2 mRNA表达量分别是单纯添加α-MSH组的0.51倍、0.75倍、0.60倍、0.51倍。2.Western blot检测各组基因在蛋白水平的表达量,结果为:与对照组相比,转染组、添加组和转染添加组中,MC1R的蛋白表达量分别是对照组的0.84倍、1.89倍、1.11倍,差异极显著(P<0.01);Mitf的蛋白表达量分别是对照组的0.77倍、1.25倍、1.21倍,差异显著(P<0.05);Tyr的蛋白表达量分别是对照组的0.90倍、1.35倍、1.24倍,差异极显著(P<0.01);Tyrp2的蛋白表达量分别是对照组的0.92倍、1.12倍、1.07倍,且差异极显著(P<0.01)。转染添加组中MC1R、Mitf、Tyr、Tyrp2基因的蛋白表达量分别是单纯添加α-MSH组的0.59倍、0.96倍、0.92倍、0.95倍。3.用酶标仪分别测定各组黑色素细胞中黑色素的A475吸光值,结果显示:与对照组相比,转染组、添加组和转染添加组黑色素的产量分别是对照组的0.65倍、1.93倍、1.20倍,且呈差异极显著(P<0.01)。转染添加组的黑色素产量是单纯添加α-MSH组的0.62倍。4.用MTT法分别测定四组黑色素细胞增殖率,结果显示:与对照组相比,转染组、添加组和转染添加组黑色素细胞的增殖率分别是对照组的0.98倍、1.08倍、0.98倍,但没有显著差异。由此得出结论:过表达miRNA-324-3p可以抑制α-MSH对MC1R、Mitf、Tyr、Tyrp2基因的表达水平。miRNA-324-3P通过调控羊驼黑色素细胞中黑色素形成的c AMP路径,抑制α-MSH对黑色素细胞产生黑色素的促进作用。