目的：　　通过比较酶消化法、组织贴块法、免疫磁珠分选法三种方法原代培养小鼠肺微血管内皮细胞(PMVECS)的差异，探讨一种高效、稳定的小鼠PMVECs原代培养方法。　　方法：　　选取45只1周龄Balb/c小鼠，随机分成3组，酶消化法组、组织贴块法组、免疫磁珠分选法组各15只。麻醉消毒后无菌条件下剪取小鼠心肺组织置超净台内。分别采用酶消化法、组织贴块法、免疫磁珠分选法三种方法分离培养小鼠PMVECs，观察细胞形态学以及Ⅷ因子相关抗原免疫荧光染色鉴定内皮细胞，计算个方法原代培养成功率及从原代培养开始到首次传代所需时间，测定细胞纯度，MTT法绘制生长曲线及计算传代次数。采用SPSS软件数据进行分析。　　结果：　　酶消化法获得的细胞显微镜下可见圆形、短梭形、多边形等内皮细胞生长，也存在较多圆形贴壁不良细胞，细胞量多，生长快，原代培养3天后即长满培养瓶底，首次消化传代后细胞活性明显降低，细胞形态改变，体积增大，杂细胞增多，可见较多圆形死细胞及长梭形细胞，细胞纯度低，培养成功率低。　　组织贴块法在培养24h后PMVECs开始游出，60h后游出的内皮细胞及红细胞围绕组织块周围，多呈短梭形、多边形、融合的单胞层具有血管内皮细胞典型的铺路石样形态，纯度高，杂细胞少，但是生长缓慢，细胞数量少，分布不均匀，生长周期长，成功率低，难以用于后续实验。　　免疫磁珠分选法原代培养2d后可见免疫磁珠附着在细胞表面，经换液后大多磁珠可以从细胞表面脱落，融合成单层的细胞呈典型铺路石样排列，细胞纯度高，无混杂细胞生长，过度生长时细胞呈纺锤状，传代后细胞增殖活跃，3-5d可再次传代，残留细胞表面的磁珠经传代后可从细胞表面脱落，5代内细胞形态较稳定，且数量多、生长快，可用于实验研究。　　Ⅷ因子相关抗原免疫荧光染色细胞呈绿色荧光，证实所培养细胞为内皮细胞。　　原代培养小鼠PMVECs成功率比较:免疫磁珠分选法组较其他两种方法显著升高(P＜0.01)，组织贴块法组较酶消化法组升高(P＜0.01)。原代培养至首次传代所需时间的比较:酶消化法组较其他两种方法减少(P＜0.05)，免疫磁珠分选法组较组织贴块法组降低(P＜0.05)。培养小鼠PMVECs第2代纯度的比较:免疫磁珠分选法组纯度较酶消化法组显著升高(P＜0.01)，组织贴块法组纯度较酶消化法组显著升高(P＜0.01)，免疫磁珠分选法组纯度较组织贴块法组无显著差异(P＞0.05)。培养小鼠PMVECs生长曲线的比较:免疫磁珠分选法组细胞活性较其他两种方法升高(P＜0.05)，组织贴块法组较酶消化法组显著升高(P＜0.01)。培养小鼠PMVECs传代次数的比较:免疫磁珠分选法组较其他两种方法显著升高(P＜0.01)，组织贴块法组较酶消化法组升高(P＜0.01)　　结论：　　相对酶消化法与组织贴块法，免疫磁珠分选法可以较快获得纯度高活性好的小鼠PMVECs，是纯化小鼠PMVECs的有效方法，可用于临床基础研究。