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目的探讨不同宫颈上皮内瘤病变(Cervical Intraepithelial Neoplasia, CIN)中人乳头瘤病毒(Human Papillomaviruses, HPV)基因型及HPV58L1基因序列多态性分析。探讨宫颈液基细胞学阴性的HPV感染与病毒负荷量、年龄因素及宫颈病变程度的关系。方法1.(1)采用薄层液基细胞学(LCT)联合HC2检测HPV-DNA进行宫颈癌机会性筛查,选取LCT及HPV DNA检测均为阳性,且行宫颈锥形切除术后有明确组织病理学诊断者121例。宫颈上皮内瘤变Ⅰ级(CIN1)35例,宫颈上皮内瘤变Ⅱ级(CIN2)35例,宫颈上皮内瘤变Ⅲ级(CIN3)51例。(2)行宫颈锥形切除术后将病变组织制成蜡块,进行切片、制片。(3)通过高通量和芯片捕获技术检测121例标本中感染HPV基因型,并获得HPV58的L1基因序列。(4)应用DNAStar软件对所得出的序列结果进行比较分析L1基因的多态性。2.2011年5月至2012年12月在青岛大学医学院附属医院黄岛院区,采用薄层液基细胞学(LCT)联合HC2检测HPV-DNA进行宫颈癌机会性筛查,选取结果为LCT阴性、HPV阳性患者575例,全部行阴道镜下宫颈活检且有病理诊断。比较年龄、HPV病毒负荷量及病变级别之间的关系。结果1.121例不同级别宫颈上皮内瘤变中,检出HPV共79例,阳性检出率是(79/121)65.29%。79例HPV检出患者中,58例单一型别感染,检出率是(58/79)73.42%,21例多重感染,检出率是(21/79)26.58%。单一感染中,HPV16检出率最高,为(31/58)53.45%,其次是HPV58,检出率为(10/58)17.24%。多重感染中,以HPV58和HPV16的多重感染为主,其中10例包含HPV58,检出率为(10/21)47.62%,11例包含HPV16,检出率为(11/21)52.38%。HPV58+HPV16检出率最高,为(4/21)19.05%,其次是HPV16+HPV33,检出率为(2/21)9.52%。2.20例HPV58阳性标本中,全部测出L1基因序列,存在6个突变位点,分别是nt6014、nt6325、nt6359、nt6411、nt6416、nt6433。其中nt6014、nt6359位点变异导致所编码的氨基酸发生改变。且nt6433位点A/G突变存在于全部20例标本中,提示可能具有地域性特点。3.575例患者中宫颈活检病理诊断宫颈浸润癌1例,CIN3、CIN2、CIN1分别为26例、17例、46例,慢性宫颈炎485例。30-49岁组≥CIN3的患病风险是≥50岁组患者的1.556(0.357-6.776)倍；HPV病毒高负荷量组的患病风险是低负荷量组的2.017(0.760-5.350)倍。30-49岁年龄段组HPV病毒低、中、高负荷量者≥CIN2的患病率分别为3.2%、8.4%和10.5%(χ2=6.684,P=0.0009),差异具有统计学意义(P<0.001)。说明,在30-49岁年龄段,≥CIN2发生率随着HPV病毒负荷量升高有上升趋势。结论1.不同级别宫颈上皮内瘤变中HPV感染主要型别为HPV16型及HPV58型,其中HPV58型的L1基因存在多个突变位点。2.在LCT阴性、HPV阳性患者中,30-49岁年龄组高度病变患病率明显增加,且病毒负荷量越高,其患病率越高。由此提示,临床上30-49岁年龄段妇女,HPV负荷量≥100RLU/CO,及时的阴道镜检查,发现可疑病变行宫颈活检,能够有效地进行宫颈病变及宫颈癌的尽早发现和及时治疗,预防病变进展。