犬角膜损伤是临床常见的眼科疾病,且致盲率较高。羊膜免疫源性低,以其优越的理化特性而成为理想的生物移植材料。因此,为了探索犬角膜损伤的高效疗法,本试验首先建立了犬角膜碱烧伤疾病模型,然后采用羊膜移植术对其进行治疗,并观察病犬眼睛的临床症状、角膜组织学变化及相关细胞因子TNF-α、VEGF和TGF-β1的基因相对表达量情况。选取健康成年比格犬6只,将直径6 mm的圆形滤纸片用1 mol/L NaOH溶液浸湿,置于角膜中央1 min,然后立即用生理盐水冲洗眼球表面,制得犬角膜碱烧伤疾病模型。取剖腹产犬胎儿羊膜,制备犬羊膜片,置于DMEM甘油液中,-80℃保存。本试验用同一条犬的左眼作为对照组,仅进行碱烧伤；右眼为试验组,碱烧伤后进行羊膜移植。术后每日观察犬角膜水肿、角膜新生血管和眼分泌物等情况,于术后3、7、14、21、28和35 d测量眼内压和泪液量,并对角膜混浊、新生血管及上皮修复情况进行评分；术后35 d采集犬角膜组织,将其分成2份,一份用于病理组织学观察,组织切片用HE染色及Masson三色染色；另一份用于荧光定量PCR实验,检测TNF-α、VEGF和TGF-β1的基因相对表达量。试验结果如下：(1)术后两组犬的角膜都出现不同程度的水肿和眼分泌物增多症状,试验组犬眼球表面的羊膜植片较平整,羊膜于1周内溶解,术后5 d角膜缘出现新生血管芽,至第16 d时眼分泌物减少并恢复到正常水平；而对照组犬眼术后5 d角膜缘出现刷状的新生血管,至第28 d时仍有2只眼睛有较多的分泌物,在第6 d时有一只眼的角膜出现穿孔。至术后35 d时,试验组犬眼在角膜混浊程度及血管新生方面明显优于对照组(P<0.05),第21 d时两组犬角膜荧光素染色出现显著差异(P<0.05),试验组犬角膜着色明显轻于对照组,至术后35 d时试验组犬角膜荧光素着色不明显,对照组犬角膜呈浅着色。术后14 d,试验组犬眼的眼内压及泪液量指标升高,但处于正常生理范围之内；对照组犬眼的眼内压极显著降低(P<0.01),泪液量显著减少(P<0.05)；至第35 d时两组犬眼的眼内压及泪液量均恢复至正常水平,但对照组处于正常生理范围的下限。(2)术后35 d,犬角膜病理组织学切片显示：对照组犬角膜有较多的炎性细胞和新生血管,血管腔内有成熟红细胞,成纤维细胞肥大,基底细胞肿胀且间隙增大,胶原纤维排列紊乱；试验组犬角膜炎性细胞和新生血管相对较少,成纤维细胞扁平,胶原纤维排列相对较整齐。(3)术后35 d,试验组犬角膜组织中TNF-α、VEGF和TGF-β1的基因相对表达量极显著低于对照组(P<0.01)。由上述试验结果可知,羊膜具有抑制炎症反应、抑制血管新生和瘢痕的形成、促进角膜损伤愈合的重要作用,对犬角膜碱烧伤有一定的临床疗效。