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桑叶是被国家卫生部所认定的药食两用植物,指桑科桑属植物的叶,含有生物碱、黄酮等多种活性成分,1-脱氧野尻霉素(DNJ)便是其中之一。DNJ是一种天然的糖苷酶抑制剂,具有很强的降血糖功能,常用于治疗糖尿病等。本文研究亚临界水提取法提取桑叶中的DNJ,用柱前衍生高效液相色谱法进行定性定量测定;液质联用技术(HPLC-MS/MS)进行定性检测;将提取液通过大孔吸附树脂与阳离子交换树脂纯化,以得到较高纯度1-脱氧野尻霉素。本研究旨在为桑叶中提取纯化DNJ提供高效高得率的工艺方法,为DNJ的工业化提取和富集纯化提供了一定的理论依据。实验主要结论如下:(1)DNJ检测中,桑叶含水率7.24%,桑叶提取液用芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)柱前衍生,高效液相色谱法进行测定,出峰时间在3.7-3.9min之间;检测方法稳定性的相对标准偏差(RSD)为0.53%,重复性的RSD为0.74%,精密度的RSD为0.39%,均小于2%,检测方法良好。液质联用(HPLC-MS/MS)定性检测,确定所提取的桑叶提取液中含有DNJ,液相出峰时间3.18min,正离子源下质谱分析m/z:386.20 为 DNJ 的分子离子峰[M+H]+,m/z:368.20 为[M+H-H2O]+,m/z:190.08 为[M+H-C14H12O]+。(2)DNJ提取中以DNJ的提取得率为指标,对比亚临界水提取方法、热水浸提法与超声辅助提取法,其亚临界水法提取得率最高且环保无溶剂污染;单因素试验探究了不同工艺参数对桑叶中DNJ提取率的影响,提取得率较大时各参数的数值分别为:温度130℃,时间2h,料液比1:20g/mL;响应曲面法进行工艺优化,提取DNJ的最优提取条件为提取时间2.5h、温度132℃、料液比1 25g/mL。在此条件下DNJ提取率的预测值为84.79mg/100g,各工艺参数的影响顺序为:提取温度>料液比>提取时间。根据以上结果进行了验证实验,DNJ的提取率为82.57mg/100g。(3)DNJ纯化过程中,大孔树脂选用AB-8树脂进行吸附,洗脱剂为60%乙醇溶液,pH=7为纯化较优状态,此时吸附率为37.2%,解吸率为84.8%,纯度为3.1%,纯度较原提取液提高2.9倍;732型阳离子树脂纯化实验中,以0.5mol/L氨水溶液进行洗脱,pH=4为较优状态,此时吸附率为31.3%,解吸率为78.1%,纯度为4.1%,较原提取液提高3.8倍。动态吸附与解吸中AB-8树脂与732树脂相似,以2BV/h的速度流经树脂柱;用AB-8树脂与732树脂联合纯化,此时DNJ的纯度达到12.4%,较原提取液提高11.5倍,纯化效果较好。