当归根茎是一种最常用的补血、抗炎、保肝中药，当归多糖（ASP）是其最主要的活性成分之一。已有研究表明，ASP对肝脏有主动靶向作用且能缓解药物所致的肝损伤、减弱自由基过氧化损伤，这些均与肝细胞表面的受体介导作用密切相关，但具体机制尚不明确。本实验利用水提醇沉、凝胶柱色谱分离等方法提取和分离ASP，在此基础上研究ASP肝靶向机制及其对急性肝损伤的保护作用机制。　　第一部分、当归多糖的提取、纯化与鉴定　　以岷县当归根茎作为原料，水提醇沉、酸碱除杂等方法得到当归粗多糖，再反复冻融、超滤、微滤，最后通过凝胶柱色谱分离纯化得到精制ASP。ASP的糖含量约为93.47％。紫外可见光谱分析，ASP在210nm附近出现多糖的特征吸收峰，在260nm到280nm无核酸和蛋白质吸收峰。采用高效凝胶渗透色谱法测得ASP相对分子质量约为9.638×104Da。本部分实验得到得到糖含量高、杂质少、产率稳定的ASP。　　第二部分、当归多糖肝靶向的研究　　前期ASP组织分布实验发现ASP具有特异性肝靶向作用，且ASP富含葡萄糖半乳糖，推测可能与肝细胞表面的甘露糖受体和去唾液酸糖蛋白受体（ASGP R）特异性结合而发挥肝靶向作用。此外，甘露糖受体在肝实质细胞（PC）和非实质细胞（NPC）中均有表达，而ASGP R只在PC中大量表达，比较ASP被两种细胞的摄入量，可初步判断ASGPR是否为摄入ASP的主要受体。给大鼠尾静脉注射ASP的FITC标记物（FA），提取肝分离PC和NPC，分别用流式细胞仪测试两种细胞的平均荧光强度，发现肝实质细胞对FA的摄入有明显的浓度依赖关系，而非实质细胞则没有。PC对FA的摄入量是NPC的6～7倍，且明显强于甘露糖对照组。证明ASP主要通过PC表面的ASGPR介导作用来实现其特异性肝靶向作用。　　比较富含ASGPR的Hep G2细胞和缺乏ASGP R的He la细胞对不同浓度FA的荧光摄入量，发现HepG2细胞的荧光摄入率随着FA浓度升高而增加，且高浓度FA能使HepG2的荧光摄入率接近饱和，而Hela细胞对各浓度FA的摄入率极低。由此进一步证实ASP对ASGPR有极高的亲和性。　　综合本部分实验，发现ASP对ASGPR具有极强且专一的亲和力，并且可能主要通过肝实质细胞ASGPR介导作用实现其特异性肝靶向作用。　　第三部分、当归多糖对急性肝损伤的保护作用体内研究　　本部分实验采用给大鼠连续灌胃过量对乙酰氨基酚（APAP）的方法建立大鼠急性肝损伤模型，探究ASP对APAP肝毒性的保护作用。ASP能在一定程度上降低大鼠血浆的AST和ALT值。组织形态学观察也发现当归多糖能明显抑制过量APAP导致的肝叶结构的破坏。以上实验表明，ASP能预防和缓解肝损伤，且有较好的治疗效果。　　分析大鼠肝脏指标，发现ASP能显著性升高肝脏谷胱甘肽（GSH）的含量。对各组肝脏组织样本进行Western Blot实验，发现ASP能促进Bcl-2的表达，抑制Bax的表达，同时抑制激活Caspase-3。ASP对急性肝损伤的保护作用机制可能是ASP提高肝脏GSH的含量，抑制肝细胞内的氧化应激，进而促进Bcl-2的表达，抑制Bax表达，同时抑制Caspase-3的激活来抑制线粒体紊乱导致细胞坏死/凋亡。　　第四部分、当归多糖对急性肝损伤保护作用体外研究　　用APAP干预肝实质细胞，建立APAP损伤大鼠肝实质细胞模型，探究ASP对APAP损伤大鼠肝实质细胞发挥的保护作用。采用“原位两步灌流法”提取大鼠原代肝细胞，离心后得到纯度＞95%肝实质细胞，4mg/mL APAP干预细胞6h使细胞活力下降至49.38%，25μg/mL ASP干预细胞3h则将细胞活力提升至79.51%。用不同浓度ASP干预细胞，测试细胞中SOD值，发现ASP能显著性升高细胞SOD值，且有剂量依赖关系。　　结合第三、四部分实验，得出结论ASP能作用于大鼠肝实质细胞，促进胞内GSH的生成，提高SOD含量，缓解胞内氧化应激反应，同时促进Bcl-2的表达，抑制Bax的表达和Caspase-3的活化，缓解线粒体功能紊乱，抑制肝细胞的坏死/凋亡，从而预防和治疗APAP的肝毒性。