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环状RNA(circRNAs)是一类具有良好保守性的内源非编码RNA,并且在各种细胞和组织中广泛表达。研究表明,circRNAs可作为“分子海绵”靶向吸附miRNAs并抑制其活性,进而调控miRNAs靶基因的表达量,参与转录后调控。子宫内膜容受性的建立是胚胎植入的关键因素之一,且子宫内膜容受性建立的过程伴随着子宫内膜上皮细胞(EECs)的凋亡。然而,circRNAs调控EECs凋亡的机制研究较少。本研究根据实验室前期的高通量测序数据,筛选出在奶山羊子宫容受期(RE)与容受前期(PE)子宫内膜组织中差异性表达的circRNA3890。通过生物信息学预测发现,circRNA3890有可能作为“分子海绵”吸附miR-26b-3p,并且推测circRNA3890负调控miR-26b-3p在奶山羊EECs中的表达量,调控其靶基因MDM4的表达量。本研究以奶山羊EECs为研究对象,通过RNA干扰(siRNA)、过表达、stem-loop RT-qPCR、RT-qPCR、双荧光素酶活性检测系统、EdU、CCK-8、WB和细胞凋亡等检测技术,研究在EECs中circRNA3890、miR-26b-3p和MDM4三者之间的调控关系,以及它们对EECs的调控作用。本试验研究结果主要如下:1.circRNA3890可作为ceRNA抑制miR-26b-3p在EECs中的活性RT-qPCR结果表明circRNA3890在PE中的表达量显著高于RE(P<0.01),而miR-26b-3p在RE中的表达量显著高于PE(P<0.01),这与本课题组前期测序结果相一致,且miR-26b-3p和circRNA3890在奶山羊各组织中广泛表达。双荧光素酶活性检测系统试验结果显示miR-26b-3p显著下调WT-circRNA3890(野生型)的双荧光素酶活性(P<0.05),而对MUT-circRNA3890(突变型)无影响。同时,过表达circRNA3890下调miR-26b-3p在EECs的表达量(P<0.01),而干扰circRNA3890则上调miR-26b-3p在EECs的表达量(P<0.01)。此外,miR-26b-3p mimic下调circRNA3890在EECs的表达量(P<0.01),而miR-26b-3p inhibitor上调circRNA3890表达量(P<0.01)。上述试验结果表明,circRNA3890通过靶位点结合miR-26b-3p,并抑制其在EECs中的表达量。2.circRNA3890和miR-26b-3p调控MDM4在EECs中的表达使用生物信息学预测miR-26b-3p的靶基因,发现MDM4可能是miR-26b-3p的靶基因。RT-qPCR检测结果显示MDM4在PE中的表达量显著高于RE(P<0.05),与miR-26b-3p的表达趋势相反,且MDM4在奶山羊各组织中广泛表达。双荧光素酶活性试验结果显示,miR-26b-3p显著下调WT-MDM4(野生型)的双荧光素酶活性(P<0.01),且miR-26b-3p mimic下调MDM4在EECs中的m RNA和蛋白水平(P<0.01)。此外,过表达circRNA3890显著上调MDM4在EECs中的m RNA和蛋白水平(P<0.01),干扰circRNA3890显著下调MDM4在EECs中的mRNA(P<0.05)和蛋白水平(P<0.01)。同时,过表达MDM4可以上调circRNA3890在EECs的表达量(P<0.01),干扰MDM4可以下调circRNA3890在EECs的表达量(P<0.01)。上述试验结果表明,circRNA3890作为ceRNA抑制miR-26b-3p的活性,进而调控其靶基因MDM4在EECs中的表达量。3.circRNA3890、miR-26b-3p和MDM4调控EECs的增殖本试验通过CCK8与EdU检测发现,circRNA3890和MDM4促进EECs增殖(P<0.01),而miR-26b-3p抑制EECs增殖(P<0.01)。同时,凋亡试验结果显示circRNA3890和MDM4抑制EECs的凋亡(P<0.01),而miR-26b-3p促进EECs的凋亡(P<0.01)。此外,通过Western blot(WB)检测相关凋亡基因BAX、BCL2、Caspase3和P53的蛋白表达水平。试验结果显示,circRNA3890和MDM4上调BCL2的蛋白表达量(P<0.01),下调BAX、P53和Caspase3的蛋白表达量(P<0.01);而miR-26b-3p上调了BAX、P53和Caspase3的蛋白表达量(P<0.01),下调了BCL2的蛋白表达量(P<0.01)。上述试验结果表明circRNA3890和MDM4促进EECs增殖,而miR-26b-3p抑制EECs增殖。综上所述,本试验以在奶山羊容受期与容受前期子宫内膜中差异表达的circRNA3890为切入点,揭示了circRNA3890可以作为ceRNA靶向吸附miR-26b-3p,并解除对靶基因MDM4的抑制,进而促进奶山羊EECs的增殖。本研究为深入研究奶山羊容受性子宫内膜建立的分子调控机制提供了试验依据。