背景:子宫内膜异位症（简称内异症）是妇科常见疑难病之一,是子宫内膜出现在子宫腔以外的位置引起的一种雌激素依赖性疾病,影响约10%育龄女性。本病主要临床症状有痛经、慢性盆腔疼痛、性交痛、和不孕等,而且病程长,易复发,临床很难完全治愈。研究表明,血管形成是子宫内膜细胞发生异位后黏附、种植、生长的不可缺少的条件,而VEGF在组织重塑和血管生成过程中是必不可少的,通过调控VEGF信号表达来探讨药物作用机制也是内异症治疗的研究热点。同时,内异症的发生发展与异位病灶局部微环境的雌激素调控息息相关,雌激素受体在异位内膜的表达上存在调控关系。中医药治疗内异症的特色是用药期间不影响患者排卵功能,具有治病和助孕并举的优势。罗氏内异方为岭南罗氏妇科流派验方,应用临床数十余年,疗效确切。课题组前期研究发现,应用罗氏内异方可降低内异症患者血清VEGF水平、降低子宫内膜异位症模型大鼠血清雌二醇水平。基于中药多靶点的作用机制,我们推测罗氏内异方也有抑制异位病灶局部组织的血管生成、降低病灶局部雌激素浓度的作用。既往对内异症动物模型的研究均采用终点分析法,无法在治疗过程中直观、纵向观察到药物在不同治疗时间点对异位病灶的治疗作用。近年来,活体成像技术在医学生物研究领域逐渐兴起,研究者可以在动物活体状态下对目标器官或组织进行非侵入性、连续、动态的观察。光声成像技术的快速发展使可视化、纵向观察内异症病灶发生发展的想法变得有机会实现。目前国内外尚没有关于内异症动物模型的光声成像观察研究,本研究将尝试性探索光声成像在内异症动物模型的应用,并结合活体、多模态成像探讨罗氏内异方对内异症模型大鼠的治疗作用机制。目的:1.采用同种自体移植法构建大鼠皮下内异症动物模型,为内异症的研究提供新的可靠动物模型。2.探索性研究光声成像技术在内异症动物模型中的应用,为内异症的动物模型研究提供一种新的观察研究方法。在无创光声成像技术支持下,从B超成像、脉冲多普勒血流成像、光声成像三个成像模块角度观察罗氏内异方对皮下内异症模型大鼠的治疗作用。3.研究罗氏内异方对皮下内异症模型大鼠的治疗作用,从病灶体积、血管生成和雌激素及雌激素受体三方面观察和探讨罗氏内异方对子宫内膜异位症的治疗作用。方法:1.以SD大鼠为载体,采用其自体子宫内膜组织,通过同种自体移植法建立大鼠皮下内异症模型,并进行病理组织学鉴定。2.采用超高效液相色谱-质谱连用的方法对罗氏内异方合剂进行主要质控成分的定性检测。3.将内异症模型大鼠随机分为3组,分别为模型组、西药组、罗氏内异方组。建模3周后开始药物干预,共用药3周。每组随机抽取3只模型大鼠在治疗1周、2周3周时应用活体成像技术对模型大鼠的移植物进行无创、连续地观察。通过B超成像监测移植物组织体积大小;通过脉冲多普勒血流成像监测移植物组织平均血流速度、时间速度积分、血流阻力;通过光声成像监测移植物组织总血氧饱和度和血红蛋白以及平均血氧饱和度和血红蛋白表达。4.3组内异症模型大鼠均于药物干预3周后取材,并对移植物组织进行病理组织学观察,采用免疫组化法测定移植物组织VEGF、CD34表达情况;通过实时荧光定量PCR（q PCR）法和蛋白质免疫印迹（Western Blot）法检测移植物组织EGFR、GPR30、ERα、ERβmRNA和蛋白的表达情况;采用酶联免疫吸附（ELISA）法检测移植物组织雌二醇（E2）的表达情况。结果:1.建立了大鼠背部皮下内异症动物模型,大鼠背部皮下自体移植法易于复制、病灶生长稳定,是一种改良的、可靠的内异症造模方法。2.应用超高效液相色谱-质谱连用技术分析鉴定罗氏内异方的药物成分,发现可信度在0.7以上物质共491个。其中包括萜类92个,黄酮类66个,苯丙素类64个,生物碱类50个,酚类37个等;发现益母草碱、川芎嗪、丹参素、绿原酸、姜黄素、白藜芦醇、金丝桃苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、贝母甲素、去甲乌药碱等主要控质成分。3.应用超声-光声成像方法对内异症模型大鼠进行活体成像,分别在干预1周、2周、3周时采集了异位病灶的B超、脉冲多普勒血流、光声成像图像并对相关指标进行统计分析。B超结果:移植物体积（VOL）:在治疗3周时,罗氏内异方组、西药组VOL均低于模型组（P<0.05,P<0.05）。脉冲多普勒血流结果:平均血流速度（Mean Vel）:在治疗3周时,罗氏内异方组、西药组Mean VEL均低于模型组（P<0.05,P<0.01）。速度时间积分（VTI）:在治疗2周时,罗氏内异方组VTI高于模型组（P<0.05）。血流阻力（RI）:模型组、西药组、罗氏内异方组RI没有组间差异（P>0.05）。光声成像结果:总血氧饱和度（SO2T）:在治疗2周、3周时,罗氏内异方组、西药组SO2T均低于模型组（P<0.01,P<0.05;P<0.01,P<0.05）。总血红蛋白（HBT）:在治疗1周、2周时,罗氏内异方组HBT均高于模型组、西药组（P<0.01,P<0.01;P<0.01,P<0.01）;治疗3周时,罗氏内异方组HBT高于西药组（P<0.05）。平均血氧饱和度（SO2A）:在治疗3周时,罗氏内异方组、西药组SO2A均低于模型组（P<0.01,P<0.01）。平均血红蛋白（HBTA）:在治疗1周时,罗氏内异方组HBTA高于模型组、西药组（P<0.05,P<0.01）。4.各组大鼠药物干预三周后,测量移植物组织体积、取材并检测血管生成和雌激素的相关指标。体重变化:造模3周时、取材前各组间大鼠体重比较均无统计学差异（P>0.05,P>0.05）。移植物体积:与模型组相比,罗氏内异方组和西药组移植物体积明显缩小（P<0.01,P<0.01）,罗氏内异方组与西药组相比,移植物体积无统计学差异（P>0.05）。免疫组化结果:VEGF表达:与模型组相比,罗氏内异方组和西药组VEGF表达降低（P<0.001,P<0.001）;罗氏内异方组与西药组比较无统计学差异（P>0.05）。CD34表达:各组之间CD34表达比较无统计学差异（P>0.05）。PCR结果:EGFR mRNA相对表达量:与模型组相比,罗氏内异方组和西药组EGFR mRNA表达均明显降低（P<0.01,P<0.01）;罗氏内异方组与西药组比较无统计学差异（P>0.05）。GPR30 mRNA相对表达量:与模型组相比,罗氏内异方组和西药组GPR30 mRNA表达均明显降低（P<0.01,P<0.05）,罗氏内异方组与西药组比较无统计学差异（P>0.05）。ERαmRNA相对表达量:与模型组相比,罗氏内异方组和西药组ERαmRNA表达均明显降低（P<0.001,P<0.001）;罗氏内异方组与西药组比较无统计学差异（P>0.05）。ERβmRNA相对表达量:与模型组相比,罗氏内异方组ERβmRNA表达明显升高（P<0.05）,西药组与模型组、罗氏内异方组比较均无统计学差异（P>0.05）。Western Blot结果:EGFR蛋白表达:与模型组相比,罗氏内异方组和西药组EGFR表达明显下降（P<0.001,P<0.001）;罗氏内异方组与西药组比较无统计学差异（P>0.05）。GPR30蛋白表达:与模型组相比,罗氏内异方组和西药组GPR30表达明显下降（P<0.001,P<0.001）;罗氏内异方组与西药组比较无统计学差异（P>0.05）。ERa蛋白表达:与模型组相比,罗氏内异方组和西药组ERα表达明显下降（P<0.05,P<0.01）;罗氏内异方组与西药组比较无统计学差异（P>0.05）。ERβ蛋白表达:与模型组相比,罗氏内异方组和西药组ERβ表达明显下降（P<0.01,P<0.01）;罗氏内异方组与西药组比较无统计学差异（P>0.05）。ELISA结果:E2表达:与模型组相比,罗氏内异方组和西药组E2表达均明显下降（P<0.001,P<0.001）;罗氏内异方组与西药组比较E2表达明显下降（P<0.05）。结论:1.建立易复制、病灶稳定生长、造模成功率高的皮下内异症大鼠模型。2.分析鉴定了罗氏内异方所含药物的化学成分,主要包括:益母草碱、川芎嗪、丹参素、绿原酸、姜黄素、白藜芦醇、金丝桃苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷、贝母甲素、去甲乌药碱等。3.光声成像技术实现了对皮下模型大鼠的异位病灶结构成像、血流和氧合的功能成像,并且罗氏内异方可以降低异位病灶局部组织的血流速度,改善异位病灶的局部血供循环,同时降低异位病灶局部组织的血氧饱和度。4.罗氏内异方可以缩小内异症模型大鼠异位病灶的体积,降低异位组织内VEGF、EGFR、GPR30、ERα、ERβ、以及E2的表达水平,表明罗氏内异方具有抑制内异症异位病灶的血管生成和降低异位病灶雌激素及雌激素受体水平的作用。