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目的:观察Compound 26对主动脉平滑肌细胞(A0184)迁移与增殖的影响;探讨RhoA信号通路在Compound 26影响主动脉平滑肌细胞迁移与增殖中的作用及信号转导机制。方法:1.主动脉平滑肌细胞A0184的培养。2.细胞迁移与增殖实验:(1)将A0184细胞随机分为空白对照组和Compound26干预组,按照Compound26不同的干预浓度,又将Compound26组分为10uM、30uM、100uM亚组;24小时后、48小时后分别计数A0184平均迁移与增殖细胞数。(2)将A0184细胞随机分为空白对照组、Compound26(30uM)干预组和RhoA激活(AngⅡ10uM)干预组。按照是否经Compound26组处理,又将RhoA激活干预组分为激活后Compound26(30uM)干预组和激活对照组。24小时后计数各组A0184平均迁移与增殖细胞数。(3)将A0184细胞随机分为空白对照组、Compound26(30uM)干预组和RhoA失活(C3胞外酶20uM)干预组。按照是否经Compound26组处理,又将RhoA失活干预组分为失活后Compound26(30uM)干预组和失活对照组。24小时后计数各组A0184平均迁移与增殖细胞数。每组5个样本,每个样本计数6个随机选择的低倍镜视野的细胞数。3.应用免疫印迹分析(Westernblot)方法,观察不同组别A0184细胞中RhoA蛋白表达情况。4.通过凝胶阻滞实验(electrophoresis mobility shift assay,EMSA),观察不同组别A0184细胞中转录因子NF-kB的活性。结果:(1)24小时A0184平均迁移与增殖细胞计数,与空白对照组(19.5±3.3)比较,Compound26 干预组 30uM 亚组(16.8±3.6)、100uM亚组(15.4±2.6)A0184细胞迁移与增殖数均减少(P<0.05);Compound26干预组10uM亚组(18.6±2.5)细胞迁移与增殖数无显著变化(P>0.05);Compound26 30uM亚组与100uM亚组之间无差异(P>0.05)。48小时A0184平均迁移与增殖细胞计数:与空白对照组(50.9±3.2)比较,Compound26 组中,30uM 亚组(45.0±2.9)、100uM亚组(41.0±2.8)A0184细胞迁移与增殖数均减少(P<0.05);Compound26组中,10uM亚组(50.2±3.6)细胞迁移与增殖数无显著变化(P>0.05);Compound26 100uM亚组比30uM亚组细胞迁移与增殖数减少(P<0.05)。(2)激活后A0184平均迁移与增殖细胞计数,与激活对照组(56.3±3.6)相比,激活后Compound26组(23.5±3.1)细胞迁移与增殖数减少(P<0.05)。(3)失活后A0184平均迁移与增殖细胞数,与失活对照组(10.5±2.5)相比,失活后Compound26组(10.7±2.4)细胞迁移与增殖数量无统计学差异(P>0.05)。(4)Westernblot实验:A0184细胞表达的RhoA蛋白量:激活后Compound26干预组与激活对照组相比,表达量减少(P<0.05)。失活后Compound26干预组与失活后对照组相比,表达量无明显变化(P>0.05)。(5)EMSA实验:激活后Compound26干预组与激活对照组相比,A0184细胞中活化的转录因子NF-kB含量减少(P>0.05)。结论:一定浓度的Compound26可以作用于人主动脉血管平滑肌,抑制主动脉平滑肌细胞的迁移与增殖;当RhoA激酶处于活化状态时,该抑制作用更为明显;当RhoA激酶处于失活状态时,该抑制作用消失;故该抑制作用可能是通过抑制活化状态的RhoA激酶实现的。