神经中枢系统(Central Nervous System,CNS)感染是临床上常见疾病,由于其高致死率和产生严重后遗症而倍受关注。快速明确诊断是应对临床治疗非常关键,但是,现有诊断技术不能达到此目的。本课题先总结了常见CNS感染病原物种类,接着针对神经外科手术感染(Intracranial infection)17种常见细菌设计了一套MLPA探针。由于构建MLPA探针所需质粒等关键试剂一直被荷兰MRC-Holland公司垄断,除了利用合成方法制备短探针外,我们不得不逐步探索一套MLPA长探针制备方法。首先我们使用M13噬菌体克隆了17种致病细菌的MLPA长探针,并把所得的M13噬菌体载体均通过了测序验证以保证这17个克隆载体均能够用于制备MLPA探针,再通过Bsm I和Eco R V双酶切法制备获得长探针。该种探针制备方法使MLPA探针扩大化生产变得简单、快速,可以推广到其他MLPA探针大量制备工艺中。在探针验证方面,我们克隆了17个阳性标准品质粒,这些质粒各含有短探针和长探针DNA序列,经过单靶点和多靶点PCR扩增、ABI3500毛细电泳测试分析,证明我们制备的MLPA探针具备非常高的灵敏度和靶向性。课题预计仅用1 ml M13噬菌体衍生载体液体制备的探针便可满足10万次左右的MLPA反应,凸显了MLPA的廉价性,也说明了MLPA诊断技术用于CNS感染病原体诊断有市场潜力。课题也做了探针质量控制分析,为进一步将探针研发成可以商品化的诊断试剂盒奠定了基础。总之,所设计的MLPA试剂盒具有灵敏度高、快速、操作简单、便宜等优点,对CNS感染病原菌诊断具有重要医用潜力。本课题也同时设计了针对脑炎(Encephalitis)、脑膜炎(Cephalomeningitis)等非神经外科手术(Craniotomy)后感染的病原体MLPA诊断探针。首先,为体现探针的可靠性和科学性我们争取每一个靶位点找到相关的研究文献数据,其次,联合使用Raw probe、MLPA Probe Verification和The mfold Web Server等生物信息学手段组装探针和控制探针质量参数,最终得到的探针均达到MRC-Holland公司提出的MLPA探针设计标准。但是研究生学习时间紧迫未能进行探针克隆等相关试剂盒研发。