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[目 的]1.收集宣威地区肺腺癌患者组织及血液标本,完善患者相关病例信息,建立标本库。2.研究有淋巴结转移和无淋巴结转移宣威肺腺癌患者癌组织、正常组织、血液miR-125b-5p表达是否具有差异性,明确该差异是否具有一致性。3.分析宣威肺腺癌患者癌组织和正常组织之间,宣威肺腺癌患者血液标本和健康对照组之间,miR-125b-5p表达量是否具有差异。4.分析miR-125b-5p在组织及血液样本中的表达差异是否能协助诊断肺腺癌。5.分析miR-125b-5p在组织和血液样本中的表达量和临床病理特征之间的联系。6.探索最合适的实验血液成分,和最佳的核酸提取办法。[方 法]1.选取符合纳入标准的患者,收集其术中组织标本和术前血液标本。组织标本在肺组织手术离体后30分钟内收集完,正常组织离癌组织5cm以上,组织块大小<1cm,采集过程严格按照先取正常组织,后采集癌组织的先后次序。手术前24小时采集患者的外周血标本,选取患者体检健康家属作为健康人群血液标本,分装进核酸保护试剂管,且都签署知情同意书。2.采用RT-qPCR技术对宣威地区肺腺癌患者癌组织、正常组织进行检测,并分析其miR-125b-5p表达结果。3.采用RT-qPCR技术对宣威地区肺腺癌患者血液标本和健康人群对照组血液标本进行检测,并分析其miR-125b-5p表达结果。4.用ROC曲线分析miR-125b-5p在组织及血液样本中的表达差异是否能协助诊断肺腺癌。5.通过SPSS21.0软件包进行实验结果统计与分析,病人年龄以平均值±标准差(x±s)展示,多组间数据相互比较选用one-way ANOVA分析,组织间miR-125b-5p表达量选用Wilcoxon方法统计,血清、血细胞、血浆miR-125b-5p表达量用Mann-WhitneyU检验方法统计,组织及血液样本RT-qPCR所得数据采用四分位数置信区间展示,比较miR-125b-5p的表达水平与年龄、性别、肿瘤大小、TNM分期、淋巴结转移等临床病理资料的联系用双边χ2test,以P<0.05为有统计学差异。6.利用紫外分光光度仪分析BIOG法、DP503法和Trizol法在血清、血浆、血细胞中核酸提取的浓度和纯度。[结 果]1.实验收集了 41例宣威地区肺腺癌患者组织及外周血标本,并完善了相关病例信息,建立了标本库。2.实验通过比对淋巴结转移和无淋巴结转移患者组织及血清标本中miR-125b-5p的表达量,发现:有淋巴结转移患者癌组织0.6(0.063～0.789)高于无淋巴结转移患者癌组织0.0061(0.0002～0.026),P=0.11<0.05;有淋巴结转移患者正常组织6.24(0.027～8.423)高于无淋巴结转移患者正常组织0.072(0.0007～0.012),P=0.007<0.05;有淋巴结转移患者血清 0.606(0.242～0.466)高于无淋巴结转移患者血清-0.832(-1.352～-0.798),P=0.017<0.05。无论是在组织还是血清标本中,有淋巴结转移患者miR-125b-5p的表达量都高于无淋巴结转移患者。3.miR-125b-5p在宣威患者组织间样本中表达有明显差异,正常组织miR-125b-5p 表达水平 1.333(0.023～7.338)显著高于癌组织的 miR-125b-5p 表达水平0.453(0.004～1.628)P<0.05,差异有统计学意义。4.miR-125b-5p在患者血清和健康对照组样本中表达有明显差异,患者组的miR-125b-5p 表达量 0.222(-0.446～0.391)要显著高于健康组-0.325(-0.879～0.227)P<0.05,差异有统计学意义。5.ROC曲线探索miR-125b-5p作为肺腺癌的诊断指标,血清内,miR-125b-5 p相对表达量敏感度为0.687,特异度为0.818,曲线下面积(AUC)为0.753;组织中miR-125b-5p表达量灵敏度为0.517,特异度为0.759,曲线下面积(AU C)为0.638分别,对肺腺癌诊断有意义。6.miR-125b-5p的表达量和病人的年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小、分期无明显相关联系P>0.05。7.经紫外分光光度仪分析:BIOG法提取的血清(浓度:45.9±20.4;OD值260/280:1.9±0.1;OD 值 260/230:1.9±0.1)相比较血浆(浓度:35.8±12.9;OD值 260/280:1.9±0.1;OD 值 260/230:1.9±0.1)和血细胞(浓度:455.0±192.3;OD值260/280:1.7±0.1;OD值 260/230:0.8±0.2)更好,可适用于临床实际操作。[结论]1.miR-125b-5p的表达在有淋巴结转移组的癌组织,正常组织,血清,比无淋巴结转移组表达量要高,证明淋巴结转移和miR-125b-5p表达量升高存在相关性,深入了解淋巴转移和miR-125b-5p表达的机制是研究宣威地区肺腺癌的关键点。2.在宣威肺腺癌患者癌组织和正常组织之间,患者血液标本和健康对照组之间,miR-125b-5p的表达都具有明显差异。3.经ROC曲线分析两类标本miR-125b-5p的灵敏度和特异度,以及曲线下面积,证明miR-125b-5p能够作为评测指标来协助诊断肺腺癌。4.组织和血液样本的miR-125b-5p PCR表达量与患者年龄、性别、吸烟史、无明显相关性。5.在血液标本中,用BIOG法提取的血清无论是在浓度还是在纯度(OD值)上都较其他几种要更好,但和组织的RNA提取结果仍有一定差距。6.本课题的标本的提取和保存方法有良好的核酸稳定性,规范快速有序的标本提取,避免了 RNA酶的污染,对后续实验起到了保障。液氮的速冻保存,可以不需要核酸固定液的浸泡处理,降低了标本采集成本,且课题标本的采集方法能够做到长期稳定保存,适合后续实验使用。