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单股负联不分节段负链RNA病毒(Non-segments negative strand RNA virus，NSNSV)主要包括副粘病毒、弹状病毒、波纳病毒和丝状病毒，是引起动物和人类传染性疾病的一群重要疫病原。NSNSV的反向遗传操作(Reverse genetic)是通过病毒基因组cDNA操作获得病毒的过程，是90年代后期出现的新型病毒学技术，是病毒学基础和应用研究极为重要的技术手段和工具平台。通过反向遗传操作系统(reverse genetic system)对病毒基因组cDNA进行突变、缺失或外源基因插入修饰，可获得相应的突变、重组病毒或疫苗株。 一、新城疫病毒LaSota疫苗株反向遗传操作系统建立 新城疫病毒(Newcastle disease virus，NDV)为不分节段单股负链RNA病毒，作为副粘病毒科的重要成员和模型病毒，得到深入研究。重组NDV作为活病毒载体疫苗具有非凡的优点：1、NDV弱毒疫苗可同时诱导体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫，其安全有效性已被充分证明；2、NDV遗传相对稳定，仅有一个血清型；3、可通过饮水、喷雾、滴鼻、点眼或注射多种方式给苗，使用极为方便；4、NDV具有高滴度的鸡胚生长特性，生产成本极为低廉。我国新城疫疫情复杂，发病死亡率高，对养禽业造成的损失巨大，新生雏鸡都要进行新城疫免疫。NDV作为活病毒疫苗载体应用意义巨大。 本研究以我国自行选育的一株NDV弱毒LaSota疫苗株为载体，建立了相应的反向基因操作系统，通过病毒基因组cDNA的操作，成功获得感染性拯救病毒rLaSota，并构建了表达增强的绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因的重组病毒rLaSota-EGFP。研究表明，rLaSota-EGFP保持了野生型LaSota疫苗株高滴度的的鸡胚生长特性、对易感雏鸡的低致病性及良好的免疫原性，并且鸡胚连续传代20代次以上保持低致病性和外源基因EGFP的稳定表达不变。 在此基础上，构建了一系列表达传染性法氏囊病毒超强毒(very virulence infectious bursal disease virus，vvIBDV)分离株VP2抗原基因和H5亚型高致病力禽流感病毒(Avian influenza virus)分离株HA抗原基因的重组NDV，并对其生物学特