AtOxR相互作用蛋白鉴定及对抗坏血酸含量的影响研究

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抗坏血酸(Ascorbic acid,AsA),又称维生素C(VC),存在于大多数植物绿色组织中,是植物体重要的氧化还原剂,在非生物胁迫和生物胁迫响应下均对植物的生长发育起着重要作用。本课题组前期研究表明过量表达AtOxR基因与ROS的清除和AsA含量的变化存在一定的相关性,但该基因与植物非生物胁迫应答的分子作用机制尚不明确。因此,在蛋白水平深入探讨该基因对植物体内AsA水平的影响,为植物应对非生物胁迫研究提供科学理论依据。本研究探讨了 AtOxR与光形态建成因子COP9复合体AtCSN5B亚基的相互作用以及对植物体内AsA水平的影响。研究结果表明:植物体内的AsA含量在光照条件下增加,而在黑暗条件下降低。AtOxR基因在光照条件下被强烈诱导表达,在黑暗条件下被抑制表达。相反,AtCSN5B基因受光照条件抑制表达,在黑暗条件下被诱导表达。通过酵母双杂交、双分子荧光互补(BiFC)和体外Pull-down实验研究表明AtOxR与AtCSN5B之间存在相互作用。进一步分析AtOxR基因过量表达AtOxR-OE、AtOxR基因突变体atoxr、AtCSN5B基因突变体atcsn5b及野生型拟南芥WT在H2O2和NaCl胁迫处理下的应答反应。结果发现:AtOxR-OE和atcsn5b与WT相比均可以明显增强盐胁迫和氧化胁迫的耐受性,相反atoxr与WT相比可以增强对盐胁迫和氧化胁迫的敏感性。最后AtOxR基因对光调控下植物体内AsA含量的影响研究表明:暗处理AtOxR-OE体内的AsA含量低于WT,光处理AtOxR-OE体内的AsA含量高于WT。因此,通过以上研究表明,拟南芥AtOxR与光形态建成因子COP9复合体的AtCSN5B亚基相互作用可影响植物体内AsA含量,为植物抗氧化调控机制研究提供理论依据。
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