CathepsinB在食管鳞癌增殖和侵袭中的作用研究

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目的:探讨CathepsinB(组织蛋白酶B)在食管鳞癌中的表达及其对EC9706细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:收集我院心胸外科手术切除的食管癌标本共53例,记录患者临床资料信息,用Western blotting、免疫组织化学染色、RT-PCR等方法检测癌组织、癌旁组织和食管高级别上皮内瘤变中CathepsinB的表达。探讨其表达水平与食管癌患者临床病理之间的关系。靶向沉默人食管癌细胞株EC9706中CathepsinB基因,联合临床化疗药物紫杉醇、顺铂,探讨其改变对癌株增殖和侵袭能力的影响。分组:1.干扰组:沉默CathepsinB;2.药物组:紫杉醇+顺铂;3.干扰+药物组:沉默CathepsinB+紫杉醇+顺铂;4阴性对照组:加入无关siRNA序列;5.空白对照组:不做处理。结果:Western blotting、免疫组化染色结果、RT-PCR都显示CathepsinB在食管癌中表达增高。通过对患者临床资料的分析结果显示:CathepsinB的阳性表达与肿瘤组织的分化程度、淋巴结转移显著相关(P<0.05);而与患者的性别、肿瘤浸润深度、肿块最大径、远处转移、临床分期无显著相关性(P>0.05)。成功沉默人食管癌EC9706细胞株,并通过Western blotting验证CathepsinB的蛋白表达下调(P<0.05)。靶向沉默CathepsinB表达,CCK8检测细胞增殖结果:癌株在沉默CathepsinB之后的24、36、48、72h四个相应时间段与空白对照组、阴性对照组相比均出现增殖降低的现象,但仅在48h和72h两者相比差异才具有显著性(P<0.05),表明CathepsinB基因沉默后的细胞的增殖活力下降。Transwell细胞迁移实验结果显示干扰组、药物组、干扰+药物组与空白对照组、阴性对照组相比,穿过小室的细胞数量显著降低,差异具有显著性(P<0.01);三组之间相互比较差异没有统计学意义(P>0.05)。空白对照组、阴性对照组之间相互比较差异没有统计学意义。结论:本实验结果显示相对于癌旁组织,CathepsinB在食管癌组织中表达上调;并且其表达水平在“正常食管-食管高级别上皮内瘤变-食管癌”中呈现逐渐增加的表现。靶向沉默人食管癌细胞EC9706中CathepsinB基因后,抑制其体外增殖、侵袭能力;从而得出CathepsinB在食管癌的增殖、侵袭过程中可能起着重要的作用。
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