目的:1.初步探索蛋黄油治疗LPS为诱导剂HaCaT细胞为载体的增殖型寻常型银屑病模型;2.采用RT-PCR技术检测蛋黄油对LPS诱导HaCaT细胞中凋亡基因Bcl-2表达量的影响;方法:1.通过MTT实验以及细胞形态检测蛋黄油对HaCaT细胞的毒性;2.建立成熟的寻常型银屑病增殖型模型:以LPS为诱导剂HaCaT细胞为载体,通过MTT实验检测HaCaT细胞增殖率,RT-PCR检测LPS作用于HaCaT细胞后炎症基因IL-8、TNF-α的基因表达量;3.通过MTT检测蛋黄油对LPS诱导的HaCaT细胞的抑制率,Hoechst染色检测蛋黄油对LPS作用于HaCaT细胞后凋亡基因的影响,RT-PCR检测蛋黄油对LPS作用于HaCaT细胞后凋亡基因Bcl-2的影响。结果:1.蛋黄油及溶解剂DMSO作用于细胞24小时后,经MTT检测,吸光值均略低于空白组,P>0.05,差异无统计学意义,推测药物及溶解剂DMSO均对细胞没有毒性,或毒性很小。观察给药后的细胞形态变化,各组之间没有明显差异,细胞形态正常;2.LPS刺激HaCaT细胞24h,增殖率为26.36%,与空白组比较,P<0.05,差异有统计学意义,LPS刺激HaCaT细胞36h,增殖率为25.09%,与空白组比较,P<0.01,差异有显著性统计学意义。但考虑到时间成本及操作时间的便捷性,选择24h作为后续实验刺激细胞增殖的时间点,通过RT-PCR检测LPS刺激HaCaT细胞后IL-8、TNF-α炎症基因表达量,IL-8、TNF-α基因表达量显著上升,增值率分别为583.7%,295.7%,分别与空白组比较,前者,P<0.01,差异有显著性统计学意义,后者,与空白组比较,P<0.05,差异有统计学意义,说明LPS能有效促进HaCaT细胞中IL-8、TNF-α基因表达上升。结果显示,通过饥饿HaCaT细胞24h再经LPS(10μg/ml)刺激HaCaT细胞24h,该造模方法可以作为寻常型银屑病体外实验的研究模型;3.250μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL 蛋黄油均对 LPS 诱导的 HaCaT 细胞有抑制增殖作用,250μg/mL作为低剂量药物浓度,500μg/mL为中剂量药物浓度,1000μg/mL为高剂量药物浓度,与模型组比较,抑制率分别为16.72%,29.18%,47.14%。其中低剂量与模型组比较,P>0.05,差异没有统计学意义。中剂量和高剂量分别与模型组比较,P<0.05,差异有统计学意义。结果表明,随着药物浓度的增大药物对细胞的抑制率越大。不同浓度蛋黄油可下调Bcl-2基因表达,250μg/mL、500μg/mL、1000μg/mL 对 Bcl-2 的抑制率分别为 32.58%,29.55%,57.58%。其中250μg/mL、500μg/mL浓度的蛋黄油虽可下调模型组细胞中Bcl-2基因表达,但与模型组比较,P>0.05,差异没有统计学意义。1000μg/mL浓度的蛋黄油可下调模型组细胞中Bcl-2基因表达,且抑制率最高,P<0.05,差异有统计学意义。结论:1.DMSO可以作为蛋黄油的溶解剂,蛋黄油浓度在200μg/mL-1000μg/mL范围内对细胞没有毒性,对细胞生长没有明显抑制作用,可以作为药物作用于HaCaT细胞的安全浓度范围;2.LPS能有效促进HaCaT细胞生长及HaCaT细胞中炎症基因IL-8、TNF-α的表达,而据相关文献报道寻常型银屑病患者血清中IL-8、TNF-α分泌量增加,因此,再次证实LPS可以作为体外寻常型银屑病模型的刺激物,且该造模方法,饥饿HaCaT细胞24h后以10μg/mLLPS刺激24h,可以作为体外研究寻常型银屑病的模型;3.蛋黄油(250μg/mL、500μg/mL、1000g/mL)对 LPS 诱导的 HaCaT 细胞增殖有抑制作用。同时,可下调Bcl-2基因的表达量,且随着药物浓度的增加,抑制率也随之增加,推测蛋黄油抑制细胞增殖的作用,可能是通过抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达,而促进细胞凋亡。