青藤碱对大鼠骨髓来源树突状细胞分化成熟的影响及鉴定

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【目的】探讨青藤碱对大鼠来源骨髓树突状细胞(Dendritic cell,DC)体外分化及成熟的影响,并从形态、表型、分泌功能及刺激T细胞活化能力等方面进行鉴定。【方法】从大鼠股骨、胫骨取骨髓来源DC的前体细胞,分离并经GM-CSF及IL作用诱导出imDC,第7天加入LPS刺激成熟,刺激imDC成熟时,分为对照组和低、中、高不同剂量的青藤碱处理组,作用48小时后收获DC,以下方面检测各组细胞的成熟程度:1.倒置相差显微镜观察细胞形态学特征情况;2.流式细胞仪检测细胞表型CD80、RT1B的表达情况;3. EIISA检测细胞分泌细胞因子IL-12情况;4.混合淋巴细胞反应检测DC刺激同种异体T淋巴细胞活化的能力。【结果】加用LPS+不同浓度青藤碱刺激48小时后,检测结果:1.倒置显微镜下观察,LPS组可见细胞符合成熟树突状细胞形态特性;SN L组可见绝大部分树突状细胞成熟;SN M组细胞部分悬浮,成熟度差;SN H组大部分尚未成熟。2.流式细胞仪检测CD80在LPS组、SN L组、SN M组、SN H组的表达分别是93.54%、79.29%、61.40%、35.20%;与对照组相比,青藤碱低、中、高剂量组的表达显著降低(p<0.05),差异有统计学意义;检测RT1B在LPS组、SN L组、SN M组、SN H组的表达率分别是97.70%、91.20%、84.40%、65.90%与对照组相比,青藤碱中、高剂量组的表达显著降低(p<0.05),差异有统计学意义,而低剂量组无统计学差异(p﹥0.05)。3. ELISA检测细胞分泌细胞因子IL-12p70结果,对照组与低、中、高剂量组分别是2320.26±60.21,2123.35±64.14,850.01±71.21,230.19±28.87。经统计分析,与对照组相比,青藤碱中、高剂量处理后的DC培养上清中IL-12p70的含量有所降低(p<0.05),差异有统计学意义,青藤碱低剂量处理组培养上清中IL-12p70的含量无显著性差异(p﹥0.05)。4.混合淋巴细胞反应检测DC刺激同种异体T淋巴细胞活化的能力结果:1:5混合时对照组和低、中、高剂量组OD值分别是4.53±0.63、4.48±0.50、3.91±0.48、2.85±0.51;1:10混合时对照组和低、中、高剂量组OD值分别是3.86±0.49、3.80±0.41、3.29±0.38、2.61±0.51;1:20混合时对照组和低、中、高剂量组OD值分别是3.08±0.31、2.99±0.40、2.16±0.42、1.65±0.38;1:40混合时对照组和低、中、高剂量组OD值分别是1.99±0.30、1.93±0.28、1.58±0.34、1.15±0.36。经统计分析,与对照组相比,在不同的混合比例下,青藤碱中、高剂量组OD值均有显著降低((p<0.05),差异有统计学意义,而低剂量组OD值的改变无显著性差异(p﹥0.05)。【结论】多种细胞因子可体外诱导大鼠骨髓树突状细胞并促进其成熟,而青藤碱能抑制DC进一步成熟;低剂量抑制作用较弱,随着剂量的增加青藤碱对DC成熟的抑制作用增强。
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