葡萄品种夏黑（Vitis vinifera×Vitis labrusca,Summer Black）属于欧美杂种,其果皮紫黑、果实无籽、具有特别的香气、植株抗逆性强,已成为我国的鲜食葡萄品种之一。葡萄采收之后会对其进行修剪、整枝,以提高葡萄产量与品质,修剪掉的葡萄枝蔓则被当做废弃物进行焚烧。然而,研究发现修剪后的葡萄枝蔓中含有许多生物活性成分,如反式白藜芦醇、ε-葡萄素等芪类化合物以及儿茶素、表儿茶素等黄酮类化合物。并且这些化合物的含量会随葡萄枝蔓放置时间的推移而有所改变。论文主要对夏黑葡萄枝蔓中化合物的种类及含量进行分析测定、对剪枝的枝蔓在放置过程中化学成分的动态变化规律及变化机制进行分析,探究芪类化合物在葡萄枝蔓中的变化原因。1.采用超高效液相色谱—飞行时间质谱法对夏黑葡萄枝蔓提取物中化合物进行分析,初步推测出11个化合物,其中包括1种苯丙素类化合物、5种黄酮类化合物以及5种芪类化合物,在5种芪类化合物中有2种白藜芦醇二聚体、1种白藜芦醇三聚体和1种白藜芦醇4聚体。2.采用高效液相色谱法建立了夏黑葡萄枝蔓中4种化合物同时测定的方法,并通过该方法对夏黑葡萄枝蔓一年周期中白藜芦醇、ε-葡萄素、儿茶素、表儿茶素的含量进行动态累积分析,并对不同长度的夏黑葡萄枝蔓在阴干过程中化合物的含量以及含量变化速率进行分析。结果表明,在一年生长周期中,葡萄枝蔓中的白藜芦醇、ε-葡萄素、儿茶素、表儿茶素含量最高时期分别在10月、10月、7月与6月,最高含量分别为21.56μg/g、10.31μg/g、8.06μg/g、4.21μg/g。当葡萄枝蔓处理为10 cm长度放置时间为10天时,其中芪类化合物含量变化最大,其中白藜芦醇、ε-葡萄素分别约为鲜样中的290倍与53倍。当葡萄枝蔓处理为0.5 cm时,其中芪类化合物含量变化速率最快,只需4天葡萄枝蔓中芪类化合物含量就能达到最高,其中白藜芦醇、ε-葡萄素分别约为鲜样中的170倍与20倍。通过该试验可知,在葡萄生长的一年周期中芪类化合物含量达到最高的时期为5月份。而采收后处理为10 cm长度放置的葡萄枝蔓在10天时其中芪类化合物含量能达到最高,处理为0.5 cm长度放置的葡萄枝蔓中芪类化合物含量变化最快,只需要4天。3.首先,通过实时荧光定量法对处理为10 cm长度的夏黑葡萄枝蔓在放置10天过程中调控合成芪类化合物的关键基因stilben synthase（STS）与调控合成黄酮类化合物的关键基因chalcone synthase（CHS）表达量进行分析,结果表明,当葡萄枝蔓受到干旱与机械损伤时STS基因表达量上调,并且在放置第5天时表达量最高,而在整个放置过程中CHS基因表达量下调,表达量均低于鲜样中CHS的表达量。其次,通过western blot技术对葡萄枝蔓放置过程中调控芪类化合物合成的限速酶芪合酶进行分析,结果表明,与鲜样相比在放置过程中的葡萄枝蔓中的芪合酶表达水平均有上升趋势,并且在第8天时表达水平最高。最后,通过对葡萄枝蔓中苯丙烷途径中的第一步反应酶苯丙氨酸解氨酶PAL活性进行分析,在整个放置过程中PAL酶活性先上升后降低,在第7天时PAL酶活性最高。该实验结果表明,葡萄枝蔓在放置过程中芪类化合物的含量上升是由于其中调控合成芪类化合物的关键基因STS表达量上调,同时引起合成芪类化合物的限速酶芪合酶表达水平上调,最终促使芪类化合物含量上升。并且在该过程中STS基因与CHS基因存在竞争关系,从而导致CHS基因表达量下调,黄酮类化合物含量降低。PAL酶作为抗逆酶,参与芪类化合物的合成,在该过程中其活性表现为先上升后下降的变化规律。