论文部分内容阅读
帕金森病（Parkinson’s disease,PD）是一种神经退行性疾病,其特征是细胞内蛋白质包涵体的形成,主要由错误折叠和聚集形式的α-突触核蛋白（α-Synuclein,α-Syn）组成。越来越多的数据表明α-Syn与PD发病机理之间有着密切的关系,α-Syn的聚集已成为PD和其他神经退行性疾病（统称为突触核蛋白病）背景下发生的神经退行性过程中最重要的参与者。控制α-Syn的聚集过程是治疗干预PD的有效途径。迄今为止,已经报道了许多天然的和合成的小分子化合物作为α-Syn聚集的可选抑制剂。尤其是酚酸类化合物,包括许多天然产物,例如原儿茶酸,没食子酸,咖啡酸,阿魏酸,迷迭香酸,绿原酸等,对α-Syn原纤维和寡聚物的形成以及原纤维形态都有显著影响。1.以抑制α-Syn的聚集为目标,通过增强抑制剂分子的亲脂性及对血脑屏障的透过能力,并提高对α-Syn的抗聚集性能等两方面来有效修饰没食子酸（GA）,增强其与α-Syn的β-折叠片结构的可逆结合能力,阻止低聚物的早期形成,从而阻止α-Syn原纤化的发展。本文设计合成了一些具有平面共轭片状特征的化合物小分子,包括酚酸的酰胺衍生物和GA的酰胺衍生物。它们的结构通式为:共合成了23个化合物,包括苯甲酰对苯二胺类化合物,甲基保护及游离羟基的GA酰对苯二胺类化合物。以对苯二胺和苯甲酸、苯磺酸类化合物为原料,通过HATU酰化反应合成N-酰基对苯二胺类化合物,再将N-酰基对苯二胺类化合物和羧酸类、磺酸类化合物进一步酰化得到N,N’-二酰基对苯二胺类化合物;通过三溴化硼在低温的条件下对甲基保护的GA酰对苯二胺类化合物进行脱甲基得到了GA酰对苯二胺类衍生物。合成的化合物均经NMR,HRMS表征。2.对合成化合物均进行了抑制α-Syn聚集活性的分析评价（抑制率）。通过硫黄素T（Th T）荧光检测,结果显示大部分GA的酰胺衍生物的抑制率均在80%以上,最高达94.4%,比GA（78.2%）有了大幅度的提高,表现出了GA的酰胺衍生物优良的抗α-Syn聚集活性。3.对于一些抑制率较好的代表性GA酰胺衍生物进行了IC50值测定及其抑制α-Syn聚集的动力学测试。这些化合物的IC50值均在低微摩尔范围内,最低达0.98μM,进一步表明了化合物较好的抑制活性。抗α-Syn聚集的动力学结果显示,α-Syn的聚集包括三个阶段,初始阶段,指数阶段和平衡阶段。化合物3bb,3be和4ba的加入对α-Syn原纤维形成的初始阶段就显示了抑制作用并贯穿整个聚集过程。4.透射电子显微镜（TEM）分析。单独的α-Syn的聚集形态为典型的网状和成束的原纤维,化合物3bb,3be和4ba的加入使α-Syn原纤维的聚集形态显得稀疏,且更短更细,直观的表明了这些化合物对α-Syn聚集的有效抑制。5.圆二色光谱（CD）检测。对α-Syn聚集在孵育的起始状态（0 d）和结束状态（3 d）分别监测α-Syn的二级结构的变化。在起始状态,单独的α-Syn光谱在198 nm处显示出具有高度负椭圆率的随机卷曲构象。在结束状态,198 nm处的负椭圆率降低,表明随机卷曲构象数量减少,该结果对应于α-Syn的原纤维形成。化合物3bb,3be和4ba的加入使198 nm处的负椭圆率降低的程度明显降低,这表明了这些化合物抑制了α-Syn的构象转变。该结果对应于其对α-Syn聚集的抑制活性。本文设计合成了一系列包括GA在内的酚酸酰胺衍生物,其大多数具有合适的分子极性和较强的血脑屏障通透性。采用多种手段评价和分析了其对α-Syn聚集的抑制活性,发现了一些新型GA酰胺衍生物具有较好的抗α-Syn聚集活性,为预防治疗PD候选药物的研发提供了理论支持。