利用自组装技术在钛表面定向固定CD34抗体及其内皮化诱导研究

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材料表面导致的凝血问题是与血液接触材料的关键科学问题。在人工心血管植入物表面形成类似天然血管内膜,即植入物的内皮化被认为是最终解决植入后血栓形成问题和提高远期通畅率的根本途径。本论文利用自组装技术在钛表面定向固定CD34抗体,以实现材料内皮生物化修饰,并对自组装生物修饰层进行表征和功能评价。钛经碱活化后,表面产生带负电荷的羟基,自组装一层带正电荷的亲和素,通过亲和素-生物素特异结合组装一层生物素化A蛋白,牛血清白蛋白(BSA)封闭非特异性位点,通过A蛋白结合CD34抗体的Fc端实现定向固定CD34抗体,并暴露出CD34抗体的Fab端。傅立叶红外漫反射(FTIR)和免疫荧光结果显示亲和素、生物素化A蛋白和CD34抗体成功组装到材料表面;接触角结果表明自组装生物修饰层材料表面的亲水性得到改善;扫描电子显微镜(SEM)和原子力显微镜(AFM)结果表明自组装生物修饰层材料表面较均匀平滑,组装后表面粗糙度Ra降低到55.84nm,这个尺度的粗糙度有利于内皮祖细胞(EPC)的粘附生长;石英晶体微天平(QCM)检测出封闭自组装过程定向固定CD34抗体量为192ng/cm2。内皮祖细胞体外静态实验结果表明,自组装生物修饰层钛表面有利于捕获内皮祖细胞,并对内皮祖细胞的粘附、生长与增殖有良好的促进作用。内皮祖细胞体外动态实验结果表明,在流动状态下,自组装生物修饰层钛表面捕获内皮祖细胞的能力明显优于活化钛,且有利于内皮祖细胞的生长和增殖。2H动物体内实验结果表明,定向固定CD34抗体材料表面能够捕获大量的内皮细胞(EC),只有少量血小板,并且血小板激活轻微,而活化钛表面内皮细胞很少,却附着较多血小板,并且激活较严重。15D动物体内实验结果表明,定向固定CD34抗体的材料表面形成一层平滑的细胞层,但是活化钛表面却形成以平滑肌增生为主的组织。HE染色结果显示,定向固定CD34抗体材料表面诱导的组织更接近天然的内膜组织,其Ⅷ因子鉴定结果为阳性,说明其表面诱导的细胞是内皮细胞,并具有血管内皮细胞的功能。机理研究表明,自组装生物修饰层钛表面有利于捕获循环血液中的内皮祖细胞。材料表面形成内皮祖细胞单层后,不粘附、不激活血小板,从而提高材料的血液相容性。总之,定向固定CD34抗体材料表面在体外静态和动态下都有利于EPC的粘附和生长,并且动物体内也获得了良好的内皮化效果,本文探索出了心血管植入材料表面改性的一种新途径。
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