广西猪嵴病毒的感染状况调查与基因序列分析

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本研究采用RT-PCR方法对从广西9个地市采集的猪肠样以及猪粪便样品进行了猪嵴病毒(PKV)的检测,从498份样品中检测出159份阳性,阳性率为31.9%,从阳性病料中挑选21株猪嵴病毒毒株进行完整的ORF基因测序分析。在这21株毒株中有14株毒株ORF全长7467bp,编码2488个氨基酸;有7株毒株在2B基因位置连续缺失90个碱基,ORF全长7377bp,编码2458个氨基酸。广西毒株的多聚蛋白的预测剪切位点与PKV标准毒株S-1一致。广西毒株的完整ORF框与猪嵴病毒的参考毒株进行同源性比对,发现这些毒株的核苷酸同源性为86.5%-90.3%,氨基酸同源性为93.0%-97.2%;与其他动物源性的嵴病毒相比,同源性最高的是羊源,核昔酸同源性为73.2%-74.1%,氨基酸同源性为77.0%-78.2%;而同源性最低的是人源,核苷酸和氨基酸同源性分别为57.9%-59.0%和60.6%-61.5%。分析猪嵴病毒各个基因片段,发现21株毒株与猪嵴病毒参考毒株核苷酸变异最大的是VP0,同源性仅为79.8%-89.7%,而突变最小的为3D,同源性高达91%-94%;氨基酸方面,氨基酸变化最大的是VP1,同源性为85%-98.4%,氨基酸变化最小的是2C,同源性为97%-100%。对21株猪嵴病毒关键位点的分析发现,位于3D区域3个关键氨基酸模体KDELR、YGDD和FLKR高度保守;2A区域I-box/NC氨基酸基序HWAL和NCTHFV以及2C编码的第131-138位的小RNA病毒解旋酶核酸结合区GPPGTGKS也未发生突变;3C蛋白氨基酸中组成H-D-C的小RNA病毒的催化三联体的第43、86位和145位上的氨基酸以及参与胰蛋白样蛋白酶的基质结合过程的第163位氨基酸都高度保守。分析VP1基因的遗传进化关系,可以将猪嵴病毒分为4个群,广西毒株位于其中的3个群:日本、泰国毒株为主的Ⅰ群;匈牙利毒株为主的Ⅱ群;一些中国毒株为主的Ⅳ群。分析广西毒株的基因片段来源,发现GXPKV-7的VP1、3D和2B基因分别与参考毒株K-4、WB-1、XX株亲缘关系较近,而这些毒株分属于Ⅰ群、Ⅱ群和Ⅳ群,表明GXPKV-7可能发生重组。
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