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【目的】本研究利用shRNA技术敲低p53、利用CRISPR/cas技术敲除Tp53,并利用外源过表达质粒上调p53等方法,通过构建Tp53基因敲除(Tp53-/-)细胞系、培育Tp53基因敲除C57BL/6小鼠,旨在揭示p53在FMDV复制及对小鼠致病性中的生物学功能。【方法】（1）用FMDV处理PK-15细胞（porcine kidney 15 cell line）1h,用RNA-seq方法分析并用RT-qPCR（real-time quantitative polymerase chain reaction）验证以揭示宿主为对抗FMDV感染的早期反应表达谱;（2）以BHK-21与PK-15细胞为材料,用MG132与MDM2抑制剂等药物对细胞进行预处理,再用RT-qPCR与WB（western blotting）方法检测FMDV感染与未感染细胞中p53在mRNA和蛋白水平的表达,确定FMDV对BHK-21与PK-15细胞中p53的影响及相应通路;（3）利用shRNA（short hairpin RNA）技术敲低BHK-21细胞中Tp53基因的表达,然后用FMDV对细胞进行处理,研究p53表达下调对FMDV复制的影响;（4）将构建并测序鉴定的Tp53基因过表达质粒HA-Tp53与Flag-Tp53转入BHK-21细胞中,WB方法确定p53表达上调后用FMDV进行处理,检测外源p53过表达质粒对FMDV复制的影响;（5）利用CRISPR/cas9系统构建Tp53-/-的BHK-21和PK-15细胞系并用WB与测序方法进行鉴定,然后,利用敲除成功的细胞系研究p53对FMDV在BHK-21和PK-15细胞中复制的影响;（6）利用购买并繁育的Tp53-/-的C57BL/6小鼠,研究FMDV对WT（wild type）与Tp53-/-小鼠致死性;（7）利用生理盐水、轻揉震荡法分离WT与Tp53-/-小鼠腹腔巨噬细胞（rat peritoneal macrophages,RPMφ）,培养贴壁后进行FMDV进行处理,用RT-qPCR方法检测各细胞因子的表达情况;（8）1月龄WT与Tp53-/-小鼠分别用FMDV(100LD50)处理72h,然后取心脏、脾脏和肌肉固定于4%多聚甲醛中,然后用HE染色方法分析Tp53基因敲除对FMDV致病性的影响。【结果】（1）经RNA-seq分析及RT-qPCR验证,PK-15细胞经FMDV处理1h时上调TNF、CXCL2、CCL20、CCL4和IL6等细胞因子以刺激炎症反应来对抗FMDV感染;（2）MG132实验表明FMDV感染1h内通过泛素化通路抑制细胞p53在mRNA与蛋白水平的表达,再经MDM2抑制剂处理后发现,FMDV在感染早期是通过非MDM2依赖的泛素化途径抑制BHK-21中p53的表达;（3）shRNA敲低Tp53基因的表达能够抑制FMDV在BHK-21细胞中的复制;（4）外源HA-Tp53与Flag-Tp53过表达质粒上调p53表达后不能显著影响FMDV在BHK-21细胞中的复制情况;（5）利用CRISPR/cas9系统成功获得Tp53-/-的BHK-21与PK-15细胞系,且发现在Tp53-/-细胞系中FMDV复制受到抑制。此外,MDA5、RIG-I、TLR3在Tp53-/-细胞系中被上调;（6）相比于WT型C57BL/6小鼠,Tp53敲除小鼠在FMDV感染时存活率更高;（7）分离小鼠腹腔巨噬细胞并用FMDV感染,结果表明Tp53基因的敲除使IFNB-1、TNF、IL-6等发挥主要抗病毒功能的细胞因子表达被上调;（8）HE病理切片结果显示,与Tp53-/-小鼠相比,FMDV对WT小鼠的病理损伤更严重。【结论】在感染早期,FMDV经非MDM2特异性泛素化-蛋白酶体途径抑制p53的表达,而宿主主要以炎症反应抵抗感染;长期感染中,p53的敲除使IFNB-1、IRF-3、ISRE、TNF、IL6、RIG-I、MDA-5等的表达上调从而抑制FMDV的复制及其对小鼠的致病性。