相思根瘤菌质粒的研究

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本文研究了20株相思根瘤菌株对5种常见抗生素的抗性,并对它们的质粒分布进行了研究。在此基础上,运用接合转移的方法把质粒pMC73A从供体菌催娩克斯菌NG13引入受体菌相思根瘤菌MZ和AJ018中,并对接合子进行了结瘤试验、耐氨试验及固氮酶活性分析。结果显示: 1、参试的20株菌株对抗生素的抗性有明显的差异。绝大多数的菌株对Km、Sm敏感,其中YM2菌株对所有的抗生素都敏感,而菌株4-2对所有的抗生素都具有抗性,确定Tc为相思根瘤菌MZ、AJ018抗性筛选标记。 2、通过比较三种质粒检测的方法,确定了碱裂解法为相思根瘤菌的质粒快速检测方法。采用该方法对20株相思根瘤菌的质粒分布进行了检测,发现相思根瘤菌都只含有一个质粒,而菌株LR005没有检测到质粒。实验过程中,对质粒检测的条件进行了优化,确定相思根瘤菌质粒检测的菌液量为20ml。 3、运用接合转移的方法把质粒pMC73A从供体菌催娩克斯菌NG13引入受体菌相思根瘤菌MZ和AJ018中,接合频率都为10-8数量级。对接合子电泳检测表明,MZ接合子能检测到质粒pMC73A条带,而AJ018接合子未能检测出。接合子的质粒稳定性研究显示,质粒在宿主菌中具有一定的稳定性。 4、对34株接合子菌株进行结瘤实验。结果显示,所有的接合子菌株都能在马占相思的根部形成根瘤。筛选出6株结瘤能力高于野生型相思根瘤菌的菌株:MZ1、MZ2、MZ4、MZ12、AJ7、AJ9。 5、通过结瘤实验,筛选出了6个相思根瘤菌接合子,即菌株MZ1、MZ2、MZ4、MZ12、AJ7、AJ9。这6个相思根瘤菌接合子的耐氨实验和固氮酶活性研究表明:所有的菌株在(NH42SO4浓度为100mmolL-1、300mmolL-1、500mmolL-1的液体培养基中都能较好的生长,但各菌株在10mmolL-1(NH42SO4条件下不能正常固氮,不过仍具有一定的固氮能力,其固氮酶活性值(nmolml-1h-1)为:MZ1:31.231;MZ2:30.289;MZ4:29.632;MZ12:23.113;AJ7:25.328;AJ9:24.982。这表明,通过接合转移相思根瘤菌已经获得了一定的耐氨固氮能力。
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