AcMNPVorf-51基因是1994年MarinD等对AcMNPV基因组全序列进行分析预测的156个ORF中的一个。该基因由957个核苷酸组成，编码含318个氨基酸残基的大小为37KDa的蛋白质，多年以来，未见有文献报道其功能。 以ORF-51蛋白的氨基酸序列对GenBankBLAST结果表明，ORF-51蛋白内部有一个保守的RNA结合motif,预测其为RNA结合蛋白，主要与RNA的转录、修饰相关，但功能还有待试验证实。 本论文综合利用Bac-to-Bac和ET-Recombination的策略，通过基因敲除等方法研究orf-51基因在杆状病毒中的生物学功能。首先，通过PCR方法扩增orf-51基因的上下游序列，再经过克隆将抗性基因连入orf-51基因的上下游序列之间构成敲除orf-51基因的线形DNA同源片段。随后将此线形DNA同源片段电转入含AcBacmid-PG的E.coli菌株，通过ET-Recombination技术发生同源重组，最后在含ZeocinTM的低盐LB平板上筛选orf-51缺失Zeocin插入的重组BacmidpAcKO。提取pAcKODNA，将其转染sf-9昆虫细胞，以研究orf-51的缺失对AcMNPV复制的影响。用可在荧光显微镜下观察的gfp基因及可在光学显微镜下观察的polyhedrin基因作为双标记基因，GFP用以指示BV的产生及在离体细胞中的传播，POLH则用来指示重组病毒在离体细胞中感染的进程。因此，构建了两个带双标记基因的重组Bacmid：orf-51敲除型pAcKO-GP和orf-51野生型pAcwt-GP。将pAcKO-GP和pAcwt-GP的病毒DNA分别转染Sf9细胞，由GFP的传播状态可直接观察这两种重组病毒在复制能力方面有无差别。试验结果表明，pAcKo-Gp和pAcWt-GP均能产生BV和形成多角体，转染上清的感染试验进一步证实，orf-51的缺失对病毒产生BV的能力没有影响。在光学显微镜下观察到orf-51的缺失对病毒ODV的产生没有影响。生物学测定结果显示，重组病毒能感染粉纹夜蛾，病毒毒力未发生改变。 上述研究结果初步证明，orf-51基因为病毒的非必需基因，对病毒的功能没有影响。