SPR生物传感器对人免疫球蛋白G与木瓜蛋白酶相互作用研究

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:trittt
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
表面等离子共振(Surface Plasmon Resonance, SPR)技术,是一种无需标记、能实时在线监测生物分子相互作用、高灵敏快速检测技术。由于具有灵敏度高、所需试样少、样品无需标记及检测速度快等特点,被广泛应用于生命科学、环境科学、药物科学和食品安全等监测领域。自Liedberg等将SPR技术用于化学传感器研究领域以来,SPR传感器已逐渐成为传感器领域的研究热点。生物分子间的相互作用是一种基本的生命现象,生命体的机体功能是通过生物分子间的相互作用来实现的,生物分子间的相互作用是现代生命科学的研究重点之一。蛋白质是生命体内的基本生物分子,在生命过程中发挥着特殊的功能,蛋白质间的相互作用是生命科学及其相关科学领域内研究的重点。传统的分析检测方法(如放射免疫分析法、酶联免疫吸附法、亲和层析法等)都或多或少的存在一些缺点,如:需要对样品分子进行标记、费用高、耗时长、灵敏度低等。针对以上问题,本文选择傅里叶变换表面等离子共振(Fourier Transform-SurfacePlasmon Resonance, FT-SPR)生物传感器作为分析工具,对蛋白质间相互作用进行了研究。本文的主要研究内容包括:1.采用自组装单分子膜技术和共价交联技术,以巯基丙酸(MPA)为基底,将牛血清白蛋白(BSA)结合到芯片的金膜表面。利用扫描电镜对芯片的修饰结果进行了表征,并与FT-SPR所得结果进行了对比。结果表明,BSA可以牢固的结合到经MPA、EDC/NHS修饰后的芯片表面。2.以BSA为模型蛋白,研究FT-SPR在蛋白质相互作用研究上的应用。在芯片金膜表面通过自组装将MPA固定,作为基底膜,将BSA连结到基底膜上,形成以BSA为表面的生物传感器芯片。以木瓜蛋白酶作为反应蛋白,利用FT-SPR生物传感器检测BSA与木瓜蛋白酶的相互作用。以响应信号对木瓜蛋白酶浓度作图,得到拟合曲线y=-1.122×10-2x+1.407,得出BSA与木瓜蛋白酶结合的KA=1.122×10-2。结果表明,木瓜蛋白酶与BSA的相互作用较弱,与文献报道一致。该实验表明,FT-SPR生物传感器可用于蛋白质相互作用的研究。3.利用FT-SPR生物传感器研究hIgG与木瓜蛋白酶的相互作用。采用自行组装的FT-SPR装置,以MPA为基底膜,将hIgG共价键合在芯片表面。采用系列浓度木瓜蛋白酶溶液进样法,研究木瓜蛋白酶与hIgG的相互作用。采用弹性蛋白做参比蛋白进行控制实验证实,木瓜蛋白酶与hIgG相互结合的实验中所得FT-SPR信号变化是由木瓜蛋白酶与hIgG的特异性结合引起的。实验发现,在一定的浓度范围内,木瓜蛋白酶与hIgG的特异性结合与木瓜蛋白酶的浓度呈正相关。木瓜蛋白酶浓度与FT-SPR波数变量的线性拟合曲线的相关系数为0.99382。根据实验数据得出,木瓜蛋白酶与hIgG相互作用的最低反应浓度在1μg·mL-1到2μg·mL-1之间。在木瓜蛋白酶浓度为100μg·mL-1时,大约10%的hIgG被木瓜蛋白酶裂解,这与文献报道的结论是一致的。
其他文献
2009年盛夏,高二的暑假,我做了一个改变人生轨道的决定——放弃“中国式”高考,备战“洋高考”,参加托福和SAT考试,申请美国的大学。  次年3月,我终于拿到了心仪大学的录取通知书。同年8月,我刚刚成年,人生第一次一个人拖着三个超大行李箱,漂洋过海到美国求学。反复考试,反复刷分  出國,这个念头早在高一就有了。我就读的高中是外国语学校,身边很多同学都有出国的计划。但最初,家里并不支持。父母对我的期
期刊
插烯类四硫富瓦烯(tetrathiafulvalene vinylogues,TTFV)由于其具有良好的供电子特性和显著的结构特征,在有机及无机材料方面引起了广泛关注和研究。本文以噻吩醛、萘醛、以及含吡啶、冠醚基团的1,3-二硫环戊烯为原料合成了七种新的TTFV类衍生物,并用1H NMR、13C NMR、FT-IR和ESI-MS进行了结构表征;同时,通过循环伏安(cyclic voltammetr
a-,γ-倒捻子素主要是从天然植物山竹子果壳中分离提取得到的,是典型的天然氧杂蒽酮化合物,具有显著的抗癌、抗氧化、抗炎、镇痛等多种药理活性。因其活性高、低毒、副作用小等特点,近年来成为新药筛选领域研究的热点。本论文研究的主要内容分为三个部分:第一部分,查阅了大量的相关文献,比较全面的归纳总结了山竹氧杂蒽酮、α-,γ-倒捻子素及其衍生物的研究现状和药理活性,并提出了进行本论文研究的选题意义及主要研究
聚集诱导发光(AIE)现象的发现,打破了人们以往对聚集导致荧光淬灭的认识,是科学研究领域的一项重大发现。目前,科学家们已经发现了许多具有AIE效应的化合物。其中四苯基乙烯(TPE)合成方便,结构简单,其分子上的四个苯环可以绕单键自由旋转,消耗激发态分子的能量,因此没有荧光现象。但是随着分子的堆积,苯环转子的旋转受阻,能量衰减以辐射形式释放,从而表现出聚集诱导发光的效应(AIE)。我们基于本课题组在
以往的创业访谈节目,都是投资人“刁难”创业者,没见过创业者为难投资人的。可是,有这样一档节目,投资人不再着装严肃、板着脸,也不再正襟危坐地点评项目,而是与主持人玩成一片,笑声不断,甚至还会被惩罚俯卧撑、吃辣椒、讲冷笑话,完全颠覆了财经节目严肃正统的印象。它,就是“小鹿乱撞”CEO张婷杰创建的《当红辣子鸡》。  张婷杰毕业于英国卡迪夫大学传媒学院,回国后就职于深圳广电,先后担任过上市企业家访谈节目《