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农药残留免疫检测技术是国内外小分子快速检测的重要内容。本文针对拟除虫菊酯类农药制备通用抗体。以拟除虫菊酯类农药的中间体——间苯氧基苯甲酸为半抗原,用活性酯法在间苯氧基苯甲酸的羧基末端偶联载体蛋白BSA作为免疫抗原,用混合酸酐法在其羧基末端偶联载体蛋白OVA作为ELISA反应的包被抗原。用UV-2401Pc型号的紫外分光光度计对合成的人工抗原、BSA、OVA以及半抗原进行全波长扫描,鉴定人工抗原偶联成功与否,经过扫描鉴定,偶联物在280nm处的紫外吸收峰型与单一蛋白吸收峰型的变化比较,可以初步判断偶联成功。 用上述制备的人工抗原PBA-BSA作为免疫抗原,制备#0631,#0629,#0977抗血清。抗血清效价测定依次达到1:204800,1:819200;1:409600。用#0629血清确定抗原抗体工作浓度,抗原工作浓度为6μg/mL,抗体工作浓度为血清稀释6000倍。在此工作浓度下,用9种拟除虫菊酯进行交叉测试,抗体可以识别高效氯氟氰菊酯,氰戊菊酯,氟菊酯和百树菊酯等几种农药。以高效氯氟氰菊酯为研究对象,检测的标准曲线方程为Y=-0.8129X+2.3439,R2=0.9965.I50为0.76mg/ml。检测线性范围1-10000μg/mL。检测精确度用微量板的批内和批间误差表示。批内变异系数为CV=4.7%,批间平均变异系数为CV=4~7.1%。 用高效氯氟氰菊酯对ELISA检测条件优化,抗原工作浓度为6μg/mL,抗体工作浓度血清稀释6000倍。反应体系封闭液1%OVA,封闭时间2h,离子强度0.2~0.3M,有机溶剂(甲醇,丙酮)浓度≤10%,pH值的适宜范围为7~9,反应温度37℃,时间1h,TMB显色时间10Min。