番茄抗叶霉病基因Cf-9的SNP分子标记筛选及种质资源鉴定

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番茄叶霉病是一种侵染性病害,由番茄叶霉菌(Cladosporium fulvum (Cook) Ciferri)侵染引起,番茄叶霉病菌很容易分化出新的生理小种,抗病品种一旦开始投入生产很快会被新的生理小种所克服,成为感病品种,经实践证明,培育抗病品种是目前防治番茄叶霉病的最有效措施。但是由于常规育种周期较长,因此利用分子标记技术进行分子标记辅助选择从而提高育种效率,成为育种工作的首选途径。本研究采用SNP分子标记技术筛选抗病基因Cf-9的单碱基突变位点,进而开发分子标记,并利用得到的标记对63份种质资源进行鉴定,获得含有番茄抗叶霉病基因Cf-9的番茄材料,为培育抗叶霉病新品种提供物质基础。本研究主要获得以下成果:1.应用课题组提供的以东农712(F1代)自交构建的F2离群体455个单株,通过对遗传群体的抗病性鉴定分析,证明其遗传模式符合孟德尔的显性单基因遗传规律。2.针对Cf-9基因设计两对嵌套引物,并对所有6份材料的Cf-9基因进行测序,将测序结果基因序列与GenBank上的Cj:9序列进行比对,发现3个SNP位点S918、S1040、S2690和一个碱基插入位点1910。3.根据等位基因引物设计原理针对以上突变位点设计引物,经过筛选,根据SNP位点S918设计的特异引物S918-1和上游公共引物CP-1引物对,可在抗病材料中产生250bp左右的特异性条带,而感病材料中无此条带,可应用于抗病材料筛选:并且使用S918-1和S918-2引物对及其上游公共引物对部分F2单株进行了基因分型。4.利用CP-1S918-1等位基因特异引物对63份种质资源进行筛选,获得抗病材料16份,而在人工接种鉴定中表现抗病的材料为14份。两种方法筛选出的抗病材料中有12份鉴定结果一致。
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