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研究背景与目的子宫内膜癌是一种子宫内膜的上皮恶性肿瘤,处于围绝经期和绝经后女性易发。子宫内膜癌是三大女性生殖系统肿瘤之一,其致死率仅次于卵巢癌和宫颈癌而在常见妇科恶性肿瘤中排第三位。子宫内膜癌的病因复杂,据文献报导,大部分子宫内膜癌的发生是因为内分泌紊乱,长期的持续的雌激素刺激是子宫内膜癌发病的重要因素,也与遗传以及环境等有一定关系。子宫内膜癌患者常常伴发肥胖、不孕、月经异常、多囊卵巢综合征、绝经期后延、高血压、糖尿病等因素。MAP2K4(丝裂原活化蛋白激酶激酶4)是丝裂原活化蛋白激酶激酶信号家族基因的成员之一。有报道称人类丝裂原活化蛋白激酶激酶4(MAP2K4)是由人类染色体17p11.2编码的,是基因靶向候选肿瘤抑制基因之一。MAP2K4基因的表达进行性缺失已经在胰腺癌、前列腺癌和卵巢癌中被发现,MAP2K4基因下调的结果可能包括发展成为一种倾向于入侵和转移的这种更激进的表型,从而变得更耐化学性刺激和难以灭活。在本次研究中,我们证明了 MAP2K4抑制子宫内膜癌增殖、侵袭迁移能力,并且这是由PI3K/AKT-TGF-β信号通路产生,为子宫内膜癌的发生和发展的分子机制研究提供新思路。研究内容与方法1、建立过表达MAP2K4的子宫内膜癌细胞株:Ishikawa-MAP2K4和RL95-2-MAP2K4;2、增殖方面的影响:MTT、EDU、平板克隆、细胞周期、裸鼠皮下成瘤实验检测MAP2K4增殖能力;3、迁移、侵袭的影响:Transwell、Boyden、划痕实验来检测MAP2K4迁移和侵袭能力;4、MAP2K4对子宫内膜癌影响的分子机制:Western Blot检测细胞周期、EMT、PI3K/AKT相关信号通路蛋白,寻找相关的分子机制。结果1、MAP2K4抑制子宫内膜癌细胞的增殖体外功能试验MTT,EDU,平板克隆,细胞周期实验显示,在Ishikawa-MAP2K4和RL95-2-MAP2K4显著抑制了细胞周期G1向S期转化;裸鼠皮下成瘤实验证明MAP2K4过表达后,与对照组相比,细胞体内成瘤能力、ki-67和PCNA的表达量均显著降低;机制研究表明Ishikawa-MAP2K4和RL95-2-MAP2K4 使 c-Myc、CDK4 和 CCND1 表达降低,同时增强了 p27 和 p15的表达。另外我们发现 p-PI3K,p-AKT 在 Ishikawa-MAP2K4 和 RL95-2-MAP2K4中表达降低。2、MAP2K4抑制子宫内膜癌细胞迁移和侵袭Transwell、划痕、Boyden表明MAP2K4抑制细胞迁移和侵袭能力;Western blot 显示 Ishikawa-MAP2K4 和 RL95-2-MAP2K4 上调 E-cadherin,而下调N-cadherin、TGF-β、vimentin、snail,提示 MAP2K4 可能抑制子宫内膜癌 EMT进程。3、MAP2K4与临床病理参数的关系在128例子宫内膜癌组织中,MAP2K4仅与肿瘤的FIGO分期及淋巴结是否转移呈负相关(p=0.010,p=0.016);生存分析显示,高表达MAP2K4基因的患者生存时间更长。结论子宫内膜癌细胞株Ishikawa和RL95-2过表达MAP2K4基因后,我们开展了细胞增殖和侵袭转移相关的体外体内实验以及Western blot实验,结果表明MAP2K4对子宫内膜癌细胞的生长和侵袭转移起着抑制作用,我们推测这一过程是通过PI3K/AKT和TGF-β信号通路来完成。