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目的原发性肝癌(primary liver cancer)是常见的恶性肿瘤之一,发病率逐年上升,其中约一半发生在中国。大多数肝癌为肝细胞癌(HCC),而HBV感染是世界公认的原发性肝细胞癌的主要病因和促转移因素。HCC易出现早期转移,血清HBVDNA水平较高的HCC患者转移及死亡的风险更高。在恶性肿瘤细胞转移的过程中,脱落肿瘤细胞能抵抗失巢凋亡,这是转移的早期重要事件和先决条件,是转移性肿瘤细胞的标志性特征。有研究表明,SATB1通过锚着特异性的DNA序列并招募染色质重组复合体来调控基因的表达,进而促进肿瘤生长及转移。在转移性乳腺癌细胞株中沉默SATB1的表达后,锚着非依赖性生长被抑制并诱导细胞发生失巢凋亡。我们研究的目的是明确HBV、SATB1及肝癌细胞失巢凋亡之间的关系及其具体调控机制方法我们收集了40对肝癌组织及相应癌旁组织标本(20对HBV相关性肝癌及癌旁标本,20对无HBV感染的肝癌及癌旁标本),用实时定量PCR及western blot检测了肝癌及相应癌旁组织、5株不同转移潜能肝癌细胞株(2株HBV DNA阳性细胞Hep3B和HepG2.2.15,以及3株HBV DNA阴性细胞SK-HEP-1,HepG2和SMMC-7721)中SATB1的表达差异,以观察SATB1与肝癌转移及HBV感染等相关临床病理特征的关系；用包含HBV全基因组的质粒pBlue-HBV(可编码产生HBV各种蛋白)转染低表达SATB1的肝癌细胞株HepG2,并检测转染前后细胞中SATB1的表达及细胞失巢凋亡和软琼脂单克隆形成情况,进一步研究HBV.SATB1和失巢凋亡之间的关系；将7种HBV编码基因的质粒及空载体分别转入HepG2肝癌细胞,检测转染前后细胞中SATB1的表达,以筛选出调控SATB1表达的具体HBV编码蛋白；然后用包含此病毒基因的载体进一步稳定转染HepG2及Hep3B细胞,检测转染前后细胞中SATB1的表达、失巢凋亡和软琼脂单克隆形成情况,以明确HBV编码蛋白在HBV调控SATB1表达及肝癌细胞抗失巢凋亡效应中的作用；用PI-3K、JNK、ERKs和P38MAPK信号分子的抑制剂分别处理细胞,以筛选HBV编码蛋白调控SATB1表达及细胞失巢凋亡抵抗的具体信号通路；然后用罗丹明标记的活化caspases检测试剂盒检测各组细胞中caspase-3, caspase-8 and caspase-9的表达,并检测死亡受体标记蛋白FADD的表达差异,以明确SATB1抑制失巢凋亡的具体凋亡通路。结果在40对肝癌及相应癌旁组织中,有22对(55%)标本的癌组织中SATB1的表达显著高于(≥2.0-fold)相应癌旁组织；并且,SATB1的高表达与HBV感染(p<0.05)、肿瘤大小(p<0.05)、分化程度(p<0.05)、门脉转移(p<0.05)及淋巴结转移(p<0.05)相关。此外,SATB1在包含HBV全基因组的HepG2.2.15细胞及高转移潜能肝癌细胞株SK-HEP-1中高表达(以低转移潜能的Hep3B细胞为对照,△CT值：7.36±0.08 vs 10.27±0.06；7.46±0.09 vs 10.27±0.06；**P<0.01)。用pBlue-HBV质粒转染低表达SATB1的HepG2细胞后,SATB1表达增高(△CT：7.01±0.03 vs9.59±0.02；**p<0.01),失巢凋亡率降低(22.68±1.25% vs 35.51±0.86%；**p<0.01),软琼脂单克隆形成增加(24.89±2.23% vs 2.11±1.02%；**p<0.01)。增强或沉默肝癌细胞中SATB1的表达后,脱落肝癌细胞抵抗失巢凋亡的能力也随之被增强(失巢凋亡率：21.20±0.81%vs 31.79±0.88%；克隆形成率：22.09±1.84%vs 10.67±1.14%；**p<0.01)或抑制(失巢凋亡率：40.51±1.81%vs 27.48±0.79%；克隆形成率：4.91±0.76%vs 17.98±1.57%；**p<0.01)。将7个构建的病毒基因质粒及pEGFP-N1空载体分别转入HepG2肝癌细胞中,结果显示HBV编码蛋白HBx能显著上调SATB1的表达(△CT：7.69±0.07 vs 10.02±0.03；**p<0.01)。用pEGFP-N1-HBx质粒稳定转染HepG2和Hep3B细胞,结果表明HepG2-HBx及Hep3B-HBx细胞中SATB1的表达随着HBx表达的增加而显著增高(△CT：7.59±0.05 vs 9.86±0.02；7.79±0.06 vs 10.39±0.02；**p<0.01),细胞失巢凋亡减少(21.86±1.79% vs 34.12±1.32%；19.87±1.98% vs35.07±1.56%；**p<0.01),软琼脂单克隆形成增多(22.32±1.82% vs 2.24±0.95%；26.57±1.94% vs 5.04±0.99%；**p<0.01)。然后用SATB1-siRNA1转染HepG2-HBx细胞,检测结果显示在HBx高表的HepG2-HBx细胞中,SATB1表达受抑制后细胞抵抗失巢凋亡的能力也显著降低,细胞凋亡率增高(35.34±1.59%vs 23.37±2.05%；**p<0.01),细胞软琼脂单克隆形成减少(6.27±1.11% vs 23.18±1.83%；**p<0.01)。用PI-3K、JNK、ERK1/2和P38MAPK信号分子的抑制剂分别处理HepG2-HBx细胞24h后,与仅用DMSO处理的HepG2-HBx细胞相比,ERKs和P38 MAPK信号分子抑制剂显著抑制了SATB1的表达(ΔCT：9.92±0.03 vs 7.59±0.06；10.17±0.04 vs7.59±0.06；**p<0.01)及细胞抵抗失巢凋亡的能力,细胞失巢凋亡率增加(36.80±1.61%vs 25.21±1.54%；38.51±2.19% vs 25.21±1.54%；**p<0.01),细胞克隆形成率降低(8.32±1.05% vs 22.45±2.26%；6.36±1.37% vs 22.45±2.26%；**p<0.01)。各组细胞中caspase-3, caspase-8和caspase-9的活化程度检测结果显示,随着HBx及SATB1表达的增高,caspase-8及caspase-3的活化显著下降(**p<0.01),而各组细胞中的caspase9均有活化但与HBx及SATB1的表达水平无显著相关。接着我们又检测了上述各组细胞中caspase-8的上游激活因子FADD的表达情况,发现FADD的表达水平与SATB1的表达相反,SATB1负向调控FADD (ACT:9.02±0.02 vs 6.84±0.03; 6.88±0.03 vs8.41±0.06；**p<0.01)。并且,FADD在HepG2-HBx中的表达低于HepG2肝癌细胞(△CT：7.75±0.03 vs 6.31±0.05；**p<0.01),而在HepG2-HBx-SATB1 siRNA1细胞中的表达却高于HepG2-HBx细胞(△CT：5.77±0.04 vs 7.69±0.02；**p<0.01)。结论我们的研究证实,HBV能诱导肝癌细胞中SATB1的表达及抑制脱落肝癌细胞的失巢凋亡；在HBV编码的七个蛋白(HBp、HBx、HBs、preS2、preS1、HBc及HBe)中,HBV主要通过HBx激活ERK及p38MAPK信号通路诱导SATB1的表达,并通过SATB1抑制Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)的表达及caspase-8和caspase-3的活化,进而诱导肝癌细胞的失巢凋亡抵抗。此项研究阐明了HBV编码蛋白HBx诱导SATB1表达和抑制失巢凋亡的作用及分子机制,为HBV相关性肝癌转移机制的研究提供了新的理论基础。