CCA1-like类MYB转录因子是1R类MYB的一个主要亚家族,其特征是在单个MYB结构域中含有SHAQK(Y/F)F序列。除参与生物钟调控外,在植物生长发育、开花、衰老、激素信号传递以及生物和非生物胁迫方面发挥着重要的功能。GmMYB133是本实验室从大豆中鉴定出的CCA1-like MYB转录因子,研究表明GmMYB133参与异黄酮的生物合成,且在拟南芥中异源过表达呈现出植株矮小、株型紧凑的特征。根据已有MYB转录因子的相关研究和实验室前期部分工作,本文将GmMYB133转基因拟南芥表型观察和转录组测序相结合,通过酵母单双杂交实验等手段探究GmMYB133的作用机制。主要研究成果如下:1.对GmMYB133启动子区域进行作用元件预测,发现了很多生物钟相关的光响应元件、激素及胁迫响应元件;对已获得的GmMYB133pro::GUS转基因拟南芥进行T2代GUS染色,结果显示GmMYB133在除种子外其他组织中都有所表达,且在维管组织中的表达更为明显;实时定量PCR检测了光照处理大豆中GmMYB133表达呈现节律性波动,节律周期约为24h。2.对GmMYB133转基因拟南芥进行表型观察,发现转基因株系呈现下胚轴变短、黑暗条件下下胚轴变长、开花较晚等生长发育表型;盐胁迫下种子萌发率更高、幼苗期抗盐抗旱性更强的表型特征。3.对GmMYB133转基因和野生型拟南芥进行转录组测序结果分析和实时定量PCR验证,发现GmMYB133在拟南芥中过表达导致生物钟和激素相关基因表达发生变化:生物钟调控因子CCA1、LHY和PRR5表达上升,并且与野生型相比生物节律表现出不同步变化,尤其PRR5的变化更为明显;激素合成相关的IAA合成相关基因表达下降、降解有关基因表达上升,且GmMYB133转基因拟南芥中IAA含量降低;BR合成基因DWF4下调表达;独脚金内酯合成关键酶基因LBO1显著上调表达。选取了转录组测序结果中3个变化倍数较大的激素相关基因进行酵母单杂交实验,结果显示所选基因不是GmMYB133的靶标基因,其作用机理还需进一步探究。4.以大豆开花后50d和60d胚混合样品为材料建立了酵母cDNA文库,经检测文库滴定浓度为5.8×10~7cfu/ml。GmMYB133诱饵蛋白筛选酵母文库初步得到9个可能和GmMYB133发生互作的蛋白,杂交效率为2.68%,分别为富含亮氨酸的F-box蛋白、衰老相关蛋白、核糖基转移酶、参与rDNA调控蛋白以及FBD相关的F-box蛋白,这些研究为进一步了解GmMYB133的功能机制奠定了基础。