猪圆环病毒3型(Porcine circovirus type 3,PCV3)是2016年首次于美国发现的一种新型猪圆环病毒。该病毒对处于各个年龄段的猪群均有较强的侵染性,特别是仔猪和处于妊娠期的母猪感染的几率更高。PCV3引起猪皮炎与肾病综合征(porcine dermatitis and nephropathy syndrome,PDNS)、仔猪先天性震颤(congenital tremors,CT)、母猪繁殖障碍和多系统的炎症反应等疾病,已经在世界多个国家和地区存在和流行。因此,对PCV3的检测和防治相当重要。本文根据PCV3Cap蛋白序列和大肠杆菌密码子的偏爱性,对PCV3中Cap蛋白基因序列进行优化改造并合成。把合成的Cap蛋白基因片段和EGFP荧光蛋白基因片段相连接,作为目的基因插入pET28a载体质粒的NcoⅠ和HindⅢ酶切位点之间,构建成pET28a-PCV3-Cap-EGFP重组质粒。经测序和PCR扩增鉴定正确后,转化入BL21(DE3)中,并对其进行IPTG浓度、诱导时间和温度等诱导条件的优化。通过SDS-PAGE凝胶电泳和菌液的激光扫描共聚焦显微镜结果分析可知,成功的表达出大小为53.66kDa大小的目的蛋白;目的蛋白在上清和沉淀中都有分布,大多以包涵体沉淀形式存在;在终浓度1 mmol/L IPTG和37℃条件下诱导4 h时,目的蛋白的表达量相对较高。把得到的包涵体沉淀经包涵体洗涤液洗涤、8 M尿素溶解、不同浓度梯度的复性液复性和超滤浓缩后,进行SDS-PAGE凝胶电泳和激光扫描共聚焦显微镜观察。结果显示成功的复性出目的蛋白。本实验利用大肠杆菌原核表达系统,对PCV3 Cap蛋白和EGFP荧光蛋白的融合表达进行探索研究,为PCV3相关诊断试剂和疫苗的研发奠定前提基础。