植物乳杆菌ZJ316的高密度发酵及高活性菌制剂的初步研究

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益生菌(Probiotics)一词最初是指对其他细胞生物有重大影响并通过改善微生物菌群来确保健康的微生物。现在是指通过定殖在宿主肠道内,改善宿主菌群组成的一类对宿主有益的活性微生物。由于益生菌可以抑制有害菌的生长和肿瘤细胞的形成等多种生理功能,具有应用到饲料行业的潜力。为了充分利用益生菌的功能,开拓其产品的市场,益生菌活力的保护和提高成为目前亟待研究和解决的问题。本实验以1株筛选得到的植物乳杆菌ZJ316作为研究对象,在MRS培养基的基础上,通过单因素试验以及响应面组合设计(Box-Behnken design,BBD)试验,得到的优化培养基组分为:蔗糖43.405 g/L、玉米浆干粉59.464 g/L、Na2HPO4/柠檬酸0.124 mol/L、MgSO4·7H2O 0.2 g/L、MnSO4·H2O 0.1 g/L、吐温80 1 ml/L。利用单因素实验确定菌株的最优发酵条件为:培养基初始pH为6.5,发酵温度为30℃,接种量为4%,转速为50 r/min;在此条件下,采用小试体系5 L发酵罐进行高密度发酵,得到植物乳杆菌ZJ316的生长曲线。在发酵24 h到达稳定期,活菌数可达8.01×109CFU/mL。通过单因素以及正交实验对植物乳杆菌ZJ316的冻干保护剂和贮藏条件进行优化,收集菌体的最佳离心条件为4000 r/min,15 min;冻干保护剂的配方为:海藻糖12%、麦芽糊精10%、蔗糖12%、脱脂奶粉3%,在此种复合冻干保护剂的作用下,冻干后菌剂的存活率为88.5%。对冻干后的菌制剂进行耐受性实验,发现菌株在冻干后对胆盐、Na Cl、低pH、人工胃、肠液仍有较强的耐受性;经过真空冷冻干燥得到的菌制剂贮藏在4℃、-20℃条件下,保存效果较好。筛选制备植物乳杆菌ZJ316高活力菌剂的适合载体,在高密度培养后利用米糠、麸皮、麦芽三种载体进行固体菌剂制备。结果表明植物乳杆菌ZJ316固体菌剂的适合载体为米糠,常温保藏30 d后,有效活菌数为3.67×107CFU/g,存活率为0.15%。通过比较鱼腥草、罗汉果、黄芪、脱脂奶粉、青蒿、海藻糖作为液体菌剂载体的作用,结果表明液体菌剂的适合载体是海藻糖,在25℃保藏30天后,有效活菌数为6.8×102 CFU/mL。
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