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目的:母胎界面血管生成障碍在复发性流产(Recurrent Spontaneous Abortion,RSA)中备受关注,观察补肾安胎冲剂对RSA孕鼠胚胎吸收率、子宫蜕膜组织病理形态、血清中大鼠肉瘤(Rat sarcoma,Ras)、丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)表达含量及胎盘微血管内皮细胞(Placenta microvascular endothelial cells,PMVEC)、胎盘血管平滑肌细胞(Placenta vascular smooth muscle cells,PVSMC)及胎盘成纤维细胞(Placenta fibroblast,PF)中Ras、MAPK蛋白表达的影响,评估其在促进RSA母胎界面血管新生、发育、重塑中的作用,进一步从分子、细胞水平阐述其保胎的作用机制,为临床应用提供科学依据。方法:将健康雌性CBA/J小鼠与健康雄性BALB/c小鼠按2:1比例合笼建立正常妊娠模型孕鼠10只。将健康雌性CBA/J小鼠与雄性DBA/2小鼠按2:1比例合笼建立RSA模型孕鼠50只,雌性小鼠检出阴栓或结合显微镜见雌鼠阴道涂片有大量精子视为妊娠第0天,并按妊娠顺序随机分为模型组、黄体酮组、补肾安胎冲剂高、中、低剂量组,每组小鼠各10只。于妊娠第1天,正常组、模型组孕鼠均以蒸馏水灌胃,黄体酮组、补肾安胎冲剂高、中、低剂量组分别予以相应药物灌胃,每组连续干预15天。处死孕鼠后收集每组孕鼠血清、子宫蜕膜组织样本,提取并培养PMVEC、PVSMC及PF。观察每组孕鼠胚胎丢失情况,采用苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE)分析各组孕鼠的子宫蜕膜组织形态学变化,运用酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immuno sorbent assay,ELISA)各组孕鼠血清中Ras、MAPK的含量,免疫荧光法及蛋白印迹法(Western-blot,WB)检测各组孕鼠PMVEC、PVSMC及PF中Ras、MAPK蛋白表达水平。结果:1.各组孕鼠胚胎吸收率比较:正常组孕鼠胚胎吸收率显著低于模型组(P<0.01)。与模型组相比,补肾安胎冲剂高、中、低剂量组及黄体酮组孕鼠胚胎吸收率显著降低(P<0.05)。与补肾安胎冲剂高剂量组相比,黄体酮组孕鼠胚胎吸收率与其差异无统计学意义(P>0.05),而补肾安胎冲剂中、低剂量组孕鼠胚胎吸收率明显低于补肾安胎冲剂高剂量组(P<0.01)。2.各组孕鼠子宫蜕膜组织形态学改变:正常组孕鼠蜕膜细胞形态规则,排列嵌紧、整齐,细胞核仁大、呈卵圆形,胞质正常,血管丰富且管壁完整。而模型组孕鼠蜕膜细胞数量明显减少,形态不一且排列疏松,细胞核固缩、碎裂,甚至少部分出现核凋亡、消失,胞浆水肿,血管数量明显减少,管腔狭窄,管壁不完整。与模型组相比,药物干预后的孕鼠蜕膜细胞结构、细胞数量及血管形态、数量均得到改善,其中补肾安胎冲剂高剂量组与黄体酮组效果最为显著,其细胞形态较规则,排列尚整齐、紧凑,少数细胞核固缩,血管较丰富。3.各组孕鼠血清中Ras、MAPK水平的比较:模型组孕鼠血清中Ras、MAPK含量显著低于正常组(P<0.01);与模型组孕鼠对比,黄体酮组及补肾安胎冲剂低、中、高剂量组孕鼠血清中Ras、MAPK含量升高明显,差异有统计学意义(P<0.05);与补肾安胎冲剂高剂量组相比,黄体酮组孕鼠血清中Ras、MAPK含量差异不明显,无统计学意义(P>0.05),补肾安胎冲剂低、中剂量组存在显著差异(P<0.01)。4.免疫荧光法检测各组孕鼠PMVEC、PVSMC及PF中Ras、MAPK的蛋白表达:各组孕鼠PMVEC、PVSMC及PF的Ras、MAPK在正常组阳性表达最强,模型组阳性表达明显减弱,补肾安胎冲剂低、中、高剂量组及黄体酮组阳性表达均较模型组增强,其中,补肾安胎冲剂高剂量组及黄体酮组较为显著。与正常组比较,模型组孕鼠PMVEC、PVSMC及PF中Ras、MAPK的蛋白表达下降明显(P<0.01)。与模型组相比,补肾安胎冲剂低、中、高剂量组及黄体酮组孕鼠PMVEC、PVSMC及PF中Ras、MAPK的蛋白表达均升高(P<0.01)。与补肾安胎冲剂高剂量相比,补肾安胎冲剂低、中剂量组孕鼠PMVEC、PVSMC及PF的Ras、MAPK蛋白表达均降低(P<0.01);而黄体酮组孕鼠PMVEC的Ras、MAPK蛋白表达与补肾安胎冲剂高剂量组无显著性差异(P>0.05);PVSMC的Ras蛋白表达较补肾安胎冲剂高剂量组明显下降,差异有显著统计学意义(P<0.01),而MAPK蛋白表达与补肾安胎冲剂高剂量组相近,无显著性差异(P>0.05);PF中的MAPK蛋白表达下降显著(P<0.01),而Ras蛋白表达与补肾安胎冲剂高剂量无显著性差异(P>0.05)。5.Western blot检测各组PMVEC、PVSMC及PF中Ras、MAPK蛋白的表达:与正常组相比,模型组孕鼠PMVEC、PVSMC及PF中Ras、MAPK蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。与模型组比较,补肾安胎冲剂低、中、高剂量组及黄体酮组孕鼠PMVEC、PVSMC及PF中Ras、MAPK蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与补肾安胎冲剂高剂量组对比,补肾安胎冲剂中、低剂量组孕鼠PMVEC、PVSMC及PF中Ras、MAPK蛋白表达水平显著下降(P<0.01);黄体酮组孕鼠PMVEC中MAPK蛋白表达水平降低明显(P<0.01),而Ras蛋白表达水平下降不明显,差异无统计学意义(P>0.05);PVSMC及PF中Ras、MAPK蛋白表达水平下降不显著,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.补肾安胎冲剂能改善RSA孕鼠子宫蜕膜组织病理变化,改善血管形态,促进子宫蜕膜组织血管生成,从而达到降低RSA孕鼠胚胎丢失率的作用。2.补肾安胎冲剂防止流产的机制可能与其升高RSA孕鼠PMVEC、PVSMC及PF中Ras、MAPK的蛋白表达,从而促进母胎界面血管生成,为胚胎生长发育提供充足的血供有关。