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目的：1．通过秀丽线虫行为学实验，筛选与麻醉药异氟烷敏感性作用相关的microRNAs突变体。2．构建microRNAs的转录报告基因，获得秀丽线虫microRNAs的时空表达特点。方法：1.行为学实验-RadialDispersionAssay：协调性运动（coordinatemovement）通过放射分散实验进行测试。整个实验使用同样大小、食物充足的秀丽线虫（即产卵后72h），在室温20°培养。分组情况如下：对照组：野生型线虫N2，分为不加异氟烷和加入不同浓度的（0.3%,0.6%，0.8%，1.1%）异氟烷处理。实验组：突变线虫(che-2，unc-55，unc-104，daf-2，unc-25，unc-53，unc-30，daf-16，daf-2，daf-16，lin-4，haf-2，eri-1;lin-15，eri-3，eri-9，alg-1，alg-2，ccIs4251;gsIs234，lin-15B;uIs57，sid-1;uIs69，sid-1him-5;lin-15B，oig-1，ergo-1，rde-1，rde-4，dcr-1，nrde-3，mir-1，mir-2，mir-24，mir-32，mir-46，mir47，nDf49，mir-51，mir52，nDf52，mir-54&mir-55&mir-56，mir-58，nDf59，nDf60，mir-63，nDf63;mir-63，nDf64，mir-67，mir-70，mir-75，mir-76，mir-77，mir78，mir79，mir-80，mir-81&mir-82，mir-83，mir-84，mir-85，mir-228，mir-230，mir-231，mir-234，mir-235，mir-238，mir-240，mir-240&mir-786，mir-241，mir-241&mir-84，mir-243，mir-244，mir-245，mir-246，mir-247&mir-797，mir-251，mir-252，mir-254，mir-256，mir-257，mir-260，mir-261，mir-268，mir-269，mir-270，mir-359)分为不加异氟烷和加入不同浓度的（0.3%,0.6%，0.8%，1.1%）异氟烷处理。计算不同处理下的线虫分散指数，并观察加入不同浓度异氟烷后分散指数的变化趋势。再比较野生型线虫N2和突变线虫对异氟烷敏感性变化的差异。两种不同处理下的实验各重复三次。2.行为学实验-Egg-layingDefective：整个实验使用同样大小、食物充足的秀丽线虫（即产卵后72h），在室温20°培养。分组情况如下：对照：野生型线虫N2，分为不加异氟烷和加入1.7%异氟烷处理。实验组：dcr-1突变线虫和55种microRNA突变线虫（mir-1，mir-2，mir-24，mir-32，mir-46，mir47，nDf49，mir-51，mir52，nDf52，mir-54&mir-55&mir-56，mir-58，nDf59，nDf60，mir-63，nDf63;mir-63，nDf64，mir-67，mir-70，mir-75，mir-76，mir-77，mir78，mir79，mir-80，mir-81&mir-82，mir-83，mir-84，mir-85，mir-228，mir-230，mir-231，mir-234，mir-235，mir-238，mir-240，mir-240&mir-786，mir-241，mir-241&mir-84，mir-243，mir-244，mir-245，mir-246，mir-247&mir-797，mir-251，mir-252，mir-254，mir-256，mir-257，mir-260，mir-261，mir-268，mir-269，mir-270，mir-359），均分为不加异氟烷和加入1.7vol%异氟烷处理。比较两组在相同处理下产卵缺陷表型的比率，及对异氟烷敏感性变化的差异。两组不同处理下的实验各重复三次。3.构建对异氟烷敏感的microRNA相关的转录报告基因即PmirRNA::gfp，然后将质粒DNA显微注射至线虫性腺，然后通过激光扫描共聚焦显微镜确定秀丽线虫microRNAs的时空表达特点。结果：1．应用放射分散实验筛选上述所有突变秀丽线虫。无异氟烷处理的情况下，突变线虫与野生型线虫的分散指数无显著性差异。在0.3%,0.6%和0.8%异氟烷处理下，相较于野生型线虫N2，dcr-1突变线虫分散指数显著下降，表现出更为明显的协调性运动失调，说明dcr-1突变线虫对异氟烷更加敏感（P＜0.05）。在0.6%,0.8%和1.1%异氟烷处理下，与野生型线虫N2比较，eri-3突变线虫分散指数显著下降，表现出更为明显的协调性运动失调，说明eri-3突变线虫对异氟烷更加敏感（P＜0.05）。在0.3%,0.6%和1.1%异氟烷处理下，相较于野生型线虫N2来说,随机筛选的6种microRNA突变线虫即mir-83,mir-240&mir-786,mir-77,mir-257,mir-75,mir-241分散指数下降更加明显，产生显著的协调性运动失调，即对异氟烷的反应是更加敏感（P＜0.05）。我们初步推断上述microRNA突变线虫暴露于一定浓度异氟烷下，都会表现出显著的协调性运动失调。2．对dcr-1突变和55种microRNA突变的线虫产卵缺陷实验筛选结果如下：在1.7%异氟烷处理下，相较于野生型线虫N2，dcr-1和8种micrRNA突变的线虫即mir-241&mir-84，mir-63，mir-77，mir-2，mir-247&mir-797，mir-80，mir-46，nDf63;mir-63表现出显著的产卵缺陷，即对异氟烷更加敏感（P＜0.05）。在无异氟烷处理的情况下，与野生型线虫N2相比，mir-2和mir-63本身就具有产卵缺陷的表型，可排除。6种即mir-241&mir-84，mir-77，mir-247&mir-797，mir-80，mir-46，nDf63;mir-63突变体是对异氟烷敏感的microRNA突变线虫。（P＜0.05）。3．时空表达特点：mir-80在位于近咽部和近尾部的神经元上及体壁肌肉上表达，mir-84在位于近咽部和近尾部的神经元上表达，mir-797在近咽部、虫体中部和近尾部神经元分布。结论：1．通过RadialDispersionAssay筛选发现：dcr-1，eri-3和microRNAs突变线虫表现出对异氟烷敏感性增强，产生显著的协调性运动失调的表型。2．通过Egg-layingDefective筛选发现：dcr-1和6种特异的microRNAs(mir-241&mir-84，mir-77，mir-247&mir-797，mir-80，mir-46，nDf63;mir-63）突变线虫表现出对异氟烷敏感性增强，产生显著的产卵缺陷的表型。3．时空表达特点：mir-80在位于近咽部和近尾部的神经元上及体壁肌肉上表达，mir-84在位于近咽部和近尾部的神经元上表达，mir-797在近咽部、虫体中部和近尾部神经元分布。