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为了研究λ噬菌体左向PL操纵子表达调控机理，研究N蛋白介导的转录调控因子与boxA靶位点的关系。我们设计缺失了PL操纵子中boxA及部分上游序列，采用PCR方法和引进携带突变片段方法构建缺失不同的重组质粒命名为pSH-A，pSH-A13，pSH-A18，pSH-A22，pSH-A26，pSH-A30。重组质粒携带CI857PL boxA~＊ boxB N-lac基因。将以上各缺失突变质粒转入含有CI857 PL nutL（boxA、boxB）N Kil lacZ TTT galK基因的大肠杆菌受体菌［ZH1042 rnc-，ZH1041 rnc+］。温度诱导，质粒与染色体DNA在CI857和lacZ区域发生体内同源重组。得到大肠杆菌染色体上带有CI857 PL boxA~* boxB lacZ TTT galK基因的菌株SH-A，SH-A13，SH-A18，SH-A22，SH-A26，SH-A30。最后将携带N基因的质粒转化至各突变菌株，提供N蛋白。利用双报道基因lacZ、galK检测boxA及上游序列突变对N蛋白介导的抗转录终止作用的影响。研究结果出人意料地显示：左向操纵子转录具有与右向操纵子不同的转录调控现象。经多次重复实验证明，boxA及上游序列突变导致N蛋白介导的抗转录终止功能丧失，表现在大肠杆菌RNA聚合酶不能通读转录终止子使下游galK基因表达。其作用机理正在进一步深入研究中。 我们利用N蛋白生物学特点，对James E.Wilhelm等人的RNA蛋白质单杂交系统改建。用R17蛋白特异的RNA位点替代boxB位点构建了新的lacZ、galK双报道基因菌株SHb-R17，将含R17-N融合基因的质粒介绍进以上菌株。当R17-N融合蛋白质与相应的RNA位点结合后，恢复了N蛋白介导的抗转录终止复合物，使下沈阳药科大学硕士学位论文 入噬菌体N蛋白介导的调控机理及靶位点研究游基因转录。克服了原系统敏感性差，背景高的缺点。建立了双报道基因检测RNA结合蛋白的单杂交遗传学系统。