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TANK结合激酶1(TBK1)是一种对TRL和RIG-I介导的MAVS依赖的抗病毒免疫相关信号通路中发挥作用的关键激酶,并且是诱导I型IFN产生和宿主抗病毒反应必备的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶。本文研究的TBK1样转录子即TBK1L是从斑马鱼克隆而来。相对比TBK1而言,TBK1L含有一个不完全的S_TKc结构域,缺少UBL_TBK1结构域。实时定量PCR结果显示:TBK1L在胚胎、初孵的鱼卵及ZF4细胞中持续表达,当用ssRNA病毒鲤春病毒血症病毒(SVCV)刺激ZF4细胞,TBK1L表达量并没有改变。在斑马鱼胚胎或ZF4细胞中TBK1的过表达能显著诱导斑马鱼IFN1和IFN3启动子的激活,而TBK1L的过表达却不能导致斑马鱼IFN1和IFN3启动子的激活。同样,在CPE细胞中转染TBK1具有抗SVCV效果,TBK1L却无抗病毒作用。然而过表达的TBK1L却能在RLRs、MAVS和TBK1的介导下抑制斑马鱼IFN1或IFN3启动子激活。此外,斑马鱼胚胎细胞中过表达TBK1能够诱导IFN激活基因(ISGs)的上调表达,而在胚胎中过表达TBK1L却使许多的ISGs表达量下降。这些研究结果表明斑马鱼TBK1L负调控RLRs-MAVS-TBK1信号通路。吞噬细胞NADPH氧化酶能生成用于清除病原微生物的活性氧(reactive oxygen species,ROS),在机体的防御体系中起着非常重要的作用。目前有关鱼类NADPH氧化酶功能报道较少,特别是鱼类p47phox、p40phox表达模式鲜有报道。本实验运用了RT-PCR结合RACE-PCR方法克隆了草鱼NADPH氧化酶的两个调节亚基p47phox和p40phox的cDNA全长,分别扩增其ORF,构建真核表达质粒Flag-p47phox/Flag-p40phox,运用实时荧光定量PCR方法分析了健康草鱼p47phox/p40phox基因的组织表达模式。为研究草鱼p47phox和p40phox抗菌免疫功能奠定基础。草鱼p47phox/p40phox基因cDNA全长分别为1589bp/2103bp。开放阅读框(ORF)分别为1233bp/1068bp,分别编码410/355个氨基酸(aa),与其它硬骨鱼类的相似性分别为68-91%和81-96%。氨基酸序列分析显示:草鱼p47phox含有1个PX结构域,2个SH3结构域,1个PC基序。草鱼p40phox含有一个PX结构域,一个SH3结构域,一个PB1结构域。实时荧光定量PCR的结果显示:p47phox和p40phox在草鱼胸腺、心、头肾、鳃、肠、肝、肾、脾、皮肤各组织中均有表达,其中在皮肤,心脏,胸腺中表达较高。