研究背景近年来,我国社区居民疾病谱发生显著变化,恶性肿瘤的发病率呈现上升趋势。人类肿瘤是一组由多种因素引发的疾病,存在大量基因的突变或者异常激活。然而,仅仅以致癌基因和/或抑癌基因的改变,无法解释肿瘤在发生发展过程中的所有现象,还涉及到表观遗传学的改变。表观遗传学是指基因表达在不改变DNA序列的情况下发生可遗传的改变,比如DNA甲基化、组蛋白修饰、micro RNA等等。越来越多的研究表明,表观遗传改变也是肿瘤发生和发展的主要因素。其中,组蛋白修饰通过改变染色质的结构调控基因转录活性而受到人们广泛的关注。组蛋白修饰是表观遗传调控的重要组成部分,组蛋白乙酰转移酶(HAT)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs)活性的拮抗作用共同维持组蛋白乙酰化修饰的平衡。在许多肿瘤中,组蛋白乙酰转移酶(HAT)和组蛋白去乙酰化酶(HDACs)活性之间的平衡发生了改变。而组蛋白去乙酰化酶抑制剂能够逆转HDACs的去乙酰化作用,提高组蛋白乙酰化水平,使与细胞分化、增殖抑制、细胞周期阻滞相关的基因处于转录激活状态,从而发挥肿瘤抑制作用。因此,组蛋白去乙酰化酶抑制剂是一类很有前景的抗肿瘤药物。目前已被FDA批准用于治疗癌症的表观遗传药物包括两种DNA甲基化转移酶(DNMT)抑制剂和一个种去乙酰化酶(HDAC)抑制剂。曲古抑菌素A(TSA)是近年来比较受关注的一种异羟肟酸型HDAC抑制剂。有研究表明,TSA能特异性抑制组蛋白去乙酰化酶的活性,发挥肿瘤抑制作用,但其相关机制仍不清楚。研究目的观察曲古抑菌素A(TSA)对卵巢癌细胞分化、增殖的影响并初步探讨其相关机制。研究方法:1、实验分组以卵巢癌上皮细胞系HO8910为研究对象,将细胞分为:对照组(0n M TSA)、100n M TSA实验组、200n M TSA实验组、400n M TSA实验组;2、TSA对卵巢癌细胞分化影响观察(1)应用倒置显微镜观察对照组(0n M TSA)和200n M TSA实验组在24h、48、72h三个时间点的细胞形态,并对细胞形态进行评估;(2)应用Western blot检测组蛋白H3乙酰化的整体水平以及干性标记(SOX2和OCT-4)和分化标记FOXA2的蛋白表达水平;3、TSA对卵巢癌细胞增殖影响观察(1)应用MTT检测法检测TSA对卵巢癌细胞增殖率的影响,应用Ed U检测法检测TSA对卵巢癌细胞DNA合成能力的影响;(2)应用流式细胞仪检测TSA对卵巢癌细胞细胞周期分布的影响;(3)应用Western blot检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21Cip1和细胞周期蛋白cyclin D1的蛋白表达水平。4、统计学处理应用SPSS19.0进行统计分析,实验计量资料数据均以`x±S表示,首先采用单因素方差分析(one-way ANOVA)进行多组间均数比较,如果组间差异有统计学意义,则采用独立样本t检验进行各实验组与对照组的两样本均数比较。检验水准α=0.05,p<0.05表示差异有统计学意义。结果1、与对照组相比,200n M TSA实验组的细胞在形态上发生明显的改变,是一个从类圆形-星状-梭形的形态转变过程。2、TSA以浓度依赖的方式显著上调组蛋白H3乙酰化水平;TSA处理显著下调SOX2和OCT-4的表达水平,上调FOXA2的表达水平。3、与对照组相比,TSA以浓度和时间依赖方式明显降低细胞的增殖率(均p<0.05),抑制细胞DNA合成能力。4、TSA诱发细胞周期阻滞在G1期(p<0.05),其中,400n M TSA实验组G1期细胞比例高达87.43%(p<0.01);且伴随p21cip1蛋白表达量的增加和cyclin D1表达水平的下降。结论1、曲古抑菌素A(TSA)可诱导卵巢癌HO8910细胞分化,并发生细胞形态学上的转变,可能与分化相关基因表达上调有关。2、TSA能抑制卵巢癌HO8910细胞的增殖能力,使细胞在G1/S期发生周期阻滞,与调控细胞周期相关基因的表达有关。