目的：在癌症的早期诊断已倍受重视的今天，恶性胸腔积液的确诊对于临床医师来说，仍常常十分困难，而恶性胸腔积液的产生，实质上却已提示着癌症的晚期阶段。近年的相关研究证明，血管内皮生长因子(VEGF)为一种强有力的血管生成因子，肿瘤的生长与转移均与其密切相关。本研究旨在于探究以VEGF诊断恶性胸腔积液的效能(diagnostic efficiency)。方法：本研究为遵照“对照”与“盲法”原则的前瞻性研究。113例连续、依次入院的胸腔积液住院病例纳入了本研究。对于每例纳入研究的病例，在临床常规诊疗的过程中，并于患者知情同意的前提下，尽可能地在临床进行首次胸腔穿刺抽液术时，留取新鲜胸液标本10 mL，同时留取患者血清标本2 mL，以供分别检测其中VEGF含量之用。对于某纳入研究的胸腔积液病例，若因故未能留取到合格的胸液和(／或)血清标本，那么该病例在研究的后续阶段将被排除。此外，若某病例临床上最终缺乏明确的有关胸腔积液的病因诊断，或实验室中，该病例的诊断性检验的最后结果不甚明确，则该病例将同样在分析阶段中被剔除。对于每例合格病例，均以酶免疫测定法检测其胸液与血清标本中VEGF浓度。恶性胸腔积液的参考标准为临床诊断与胸液细胞学检查结果，需要时结合胸膜活检、其它相关检查及随访结果。对于胸液、血清标本中VEGF含量的实验室检测，与相应病例的临床诊断和治疗完全独立，相互不交换信息。所有诊断性检验结果的直接读取、判定与参考标准结果的确立，二者各自独立。研究中，仅当胸液与血清标本中VEGF含量的实验室检测(包括实验检测结果的读取与计算)和所有纳入研究病例的临床资料收集(包括临床随访资料收集)均各自分别完成后，我们才针对合格病例，对照参考标准的结果，对胸液与血清中VEGF含量的实验室检测结果进行分析研究。对于每一种VEGF含量的检测策略，首先分别描述性统计良、恶性胸腔积液组中的实验检测结果，并将良、恶性组中的结果进行比较。如果良、恶性胸腔积液组间存在统计学差异，那么该检测策略用以诊断恶性胸腔积液的灵敏度与特异度，包括样本率和95％可信区间，将通过计算得出。对于计量资料，尚首先通过受试者工作特征曲线分析，计算出最佳的诊断界值。在此基础上，本研究评估并比较了针对VEGF检测的不同检测策略用以诊断恶性胸腔积液的效能。结果：依照最终诊断，纳入分析研究的81例合格病例被分为2组：恶性胸腔积液(n=32)和良性胸腔积液(n=49)。关于胸液中VEGF浓度，恶性胸腔积液组的平均水平高于良性胸腔积液组(1358±1493pg／mL vs.422±317 pg／mL.P=0.001)。同时，恶性胸腔积液组的血清中VEGF浓度均值也较良性胸腔积液组为高(650±533 pg／mL vs.137±189 pg／mL，P＜0.001)。经受试者工作特征曲线分析，最后选取的用于诊断恶性胸腔积液的胸液中VEGF浓度的界值为959.25pg／mL，相应的用于诊断恶性胸腔积液的血清中VEGF浓度的界值为212.36pg／mL。应用上述诊断界值，检测胸液中VEGF浓度用以诊断恶性胸腔积液的灵敏度与特异度分别为47％与96％；而检测血清中VEGF浓度用以诊断恶性胸腔积液的灵敏度与特异度则分别为69％与88％。若联合检测胸液与血清中VEGF浓度，则二者串联运用用以诊断恶性胸腔积液的灵敏度与特异度分别为34％与98％，二者并联运用用以诊断恶性胸腔积液的灵敏度与特异度分别为81％与86％。结论：本研究提示，作为临床常规检查的一项有益辅助项目，胸液与血清中VEGF浓度检测可用于恶性胸腔积液的诊断。受试者工作特征曲线分析，可用于最佳诊断界信的选取和诊断价值的评估。目的：近年的分子肿瘤学研究证明，以原位杂交的方法检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)信使核糖核酸(mRNA)水平有助于癌症的诊断。本研究旨在于探究胸液细胞中hTERT mRNA对于恶性胸腔积液的诊断价值。方法：本研究为遵照盲法与对照原则的前瞻性研究。研究中，对于未经选择的103份胸液标本，运用以地高辛标记的寡核苷酸探针两步原位杂交检测胸液细胞中hTERT mRNA。对于两步原位杂交法检测胸液细胞hTERT mRNA，主要实验检测步骤如下：细胞涂片的制备和冻存；杂交前处理(包括灭活内源性过氧化物酶，暴露切片细胞中mRNA，预杂交，封闭、阻断非特异性IgG等)；两步杂交：杂交后处理(封闭、阻断内源性生物素，滴加小鼠生物素化抗地高辛抗体并孵育，滴加高敏的SABC过氧化物酶复合物并孵育，显色等)；实验图像的观察、记录与分析。实验检测设阴性对照与阳性对照，以分别检验杂交反应的特异性、灵敏性及实验检测结果与理论预期值相符情况。依据预实验检测结果，在光学显微镜下，肿瘤细胞胞浆深染，呈棕黄色，细胞核除少许部位有点状着色外，余基本无着色。用作阳性对照的切片上，其它细胞呈半透明状，几乎无着色。切片背景也基本无色，或仅浅着色。在用作阴性对照的样品切片上，镜下几乎所有细胞均半透明，无着色深染的细胞，切片背景也基本无着色。对于通过胸液细胞学检查确诊的恶性胸腔积液标本，其阴性对照(杂交液中不含特异性探针，或杂交前细胞经RNA酶处理)样品切片上，隐约可见形态明显异常的细胞。因此，判定阳性和阴性实验结果的标准建立如下：无论细胞形态学观察结果如何，如果镜下有细胞浆深染、细胞核基本无着色或仅少许点状着色的细胞被识别，那么该结果即被判定为阳性；其它实验结果则被判定为阴性。所有原位杂交的切片均为2名观察者独立观察、判断并记录，当对某切片结果的定性存在分歧时，问题将由包括资深研究者在内的更大范围的讨论解决。恶性胸腔积液的参考标准为临床诊断与胸液细胞学检查结果，必要时结合胸膜活检、其它相关检查及临床随访结果。当原位杂交法检测胸液细胞hTERT mRNA(包括实验操作与结果判定)与纳入病例的临床资料收集各自完成后，两步原位杂交法检测胸液细胞hTERT mRNA的实验检测结果被用来与相应病例的临床资料(如胸液细胞学检查结果与1年多的随访结果)作对照分析。结果：依据参考标准，103例接受了诊断性检验研究的胸腔积液病例最终诊断为：恶性胸腔积液41例，良性胸腔积液55例，病因不明难以明确区分良、恶性胸腔积液的病例7例。当这7例病因不明的病例在分析阶段被剔除后，用本法可检测出的胸液细胞中hTERT mRNA用以诊断恶性胸腔积液的灵敏度与特异度分别为80％与95％。当胸液细胞中hTERT mRNA实验室检测与临床的反复胸液细胞学检查相结合时，联合检测(并联运用)用以诊断恶性胸腔积液的灵敏度与特异度则分别为90％与95％。结论：作为一项有益的、辅助性、诊断性检验方法，用原位杂交法检测胸液细胞中人端粒酶逆转录酶mRNA可望用于恶性胸腔积液的诊断。