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近年来, P-selectin在炎症反应及肿瘤转移过程中的作用越来越受到重视,以P-selectin为靶点,阻断P-selectin与其配体的结合,可能对相关疾病的治疗具有较大潜力。目前国际还没有关于P-selectin人源性抗体的报道。本研究以真核表达和原核表达系统获得P-selectin功能性片段为抗原,利用本室构建的大容量全合成人抗体库中筛选出针对P-selectin的人源性特异性抗体,力争获得能够阻断P-selectin与配体结合的中和抗体,从而为相关疾病的治疗奠定良好的基础。首先,利用RT-PCR的方法从血小板中钓取P-selectin的功能性基因片段,在大肠杆菌中实现了可溶性表达。同时利用GPI锚定技术在真核细胞细胞膜上锚定表达P-selectin功能性片段。通过全合成的方法合成了GPI信号肽基因,融合于P-selectin基因下游构建真核表达载体pMCEw2-P-selectin-GPI,转染CHO细胞,利用GPI锚定将P-selectin的功能性基因片段表达在CHO细胞表面,获得了在细胞表面长期稳定表达P-selectin功能性片段的CHO细胞株P6。其次,利用本室构建的1.35×1010的全合成人源性抗体库,以原核表达产物的P-selectin和真核GPI锚定表达的P-selectin为抗原,分别进行了特异性抗体的筛选。利用原核表达产物筛选到15株特异性较好的抗体;利用表达P-selectin功能性片段的P6细胞株,通过细胞扣除筛选的方法得到2株在噬菌体水平上特异性较好抗体1H11、2F8。最后,将利用细胞筛选方法得到的两个抗体1H11、2F8改造为全抗体形式,并进行体外抗黏附试验。实验结果初步表明,我们所筛选到的2个抗人P-selectin人源性抗体,特异性较好,亲和力较高,分别达到150pM和427pM,在体外能够抑制血小板与中性粒细胞结合,表明这两个抗体在细胞学水平上具有一定的抗黏附功能,为进一步抗体介导的相关疾病治疗研究奠定了良好基础。