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背景:近年来,口腔癌在诊断水平和治疗技术方面取得了不断进步,但口腔癌患者的生存率并未得到显著提高。一些患者在常规治疗几年后容易复发。超过50%的口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)患者在诊断时出现淋巴结转移,这是OSCC患者最常见的不良预后因素之一。外泌体(Exosome)是在多囊泡体和质膜融合后释放到周围体液中的纳米级生物囊泡。其内含有众多不同成分,如DNA、mRNA、非编码RNA、蛋白质和脂质等,作为细胞间通讯物质的载体,对受体细胞生物学功能的调节存在着重要的意义。在前期实验中,本课题组收集了正常人、未发生淋巴结转移的OSCC及已发生淋巴结转移的OSCC患者的血清各10例,提取3组血清中的外泌体,并进行蛋白质组学分析。结果发现凝血因子13(Coagulation Factor XIII,F13)的A链——凝血因子XIII A1肽(Coagulation Factor XIII A Chain,F13A1)仅在OSCC患者转移组中可被检测到,其余两组未能检测到,提示F13A1与OSCC转移存在着密切的关系,该蛋白质在OSCC中的功能值得进一步的研究。目的:基于前期蛋白质组学结果,研究F13A1在OSCC患者及正常人血液样本中表达情况;通过qPCR及免疫组织化学法检测F13A1在OSCC组织及癌旁组织中表达情况,分析F13A1与临床病理参数间的关系,探究其潜在的诊断及预后评估意义,推测F13A1潜在的生物学功能;以CD163作为M2型巨噬细胞标记物,检测M2型巨噬细胞在OSCC组织及癌旁组织中表达情况,分析其与与临床病理参数之间的关系,并探究F13A1与CD163两者表达的相关性,推测F13A1与肿瘤免疫的相关性;构建F13A1过表达、沉默及其相应阴性对照细胞系,检测各组细胞的生物学表现,探究F13A1在OSCC中的生物学功能。方法:采集健康正常人、OSCC淋巴结转移患者及OSCC未转移患者的血清与全血各10例,以上样本来源于广西医科大学第一附属医院及广西医科大学附属口腔医院。应用qPCR法检测F13A1 mRNA在血清及全血中表达情况。WB法检测血清及血清外泌体中F13A1蛋白表达情况。切取广西医科大学附属口腔医院诊断为OSCC患者的癌与癌旁组织。应用qPCR及免疫组织化学法检测F13A1表达情况,45例应用于qPCR检测,其中男性35例,女性10例,平均年龄为50.98±13.05,43例应用于免疫组织化学检测,其中男性32例,女性11例,平均年龄为52.05±13.12,分析其与临床病理参数之间的关系,检测CD163在OSCC组织及癌旁组织中表达情况,分析其与与临床病理参数之间的关系,并探究F13A1与CD163表达的相关性。应用慢病毒转染SCC9及Cal27,构建F13A1过表达、沉默表达及其相应阴性对照稳转细胞株,观察转染后细胞的表型变化。结果:(1)血清qPCR结果显示,OSCC组、OSCC淋巴结转移组、OSCC无淋巴结转移组及健康对照组之间,F13A1 mRNA表达量无明显差异。(2)全血qPCR结果显示,OSCC组(P<0.001),OSCC淋巴结转移组(P=0.001),OSCC无淋巴结转移组(P<0.001)与健康对照组比较,F13A1 mRNA表达量明显升高,差异具有统计学意义。(3)应用WB法未能检测到血清中F13A1的表达,在血清外泌体的检测中,OSCC患者淋巴结转移组的血清外泌体F13A1存在高表达,而未发生淋巴结转移的OSCC患者及正常人的血清外泌体F13A1表达较少甚至表达缺失。(4)OSCC组织及癌旁组织qPCR未发现差异,与各临床病理参数间无相关性。(5)OSCC组织及癌旁组织免疫组织化学实验发现,F13A1的蛋白在OSCC组织中表达升高,在癌旁组织中表达降低(P<0.001),T3-4组F13A1表达较T1-2组升高(P<0.001),淋巴结转移组组织中F13A1蛋白的表达水平较无淋巴结转移组组织升高(P=0.002),III-IV期组中F13A1蛋白表达较I-II期组升高(P<0.001),其余病理参数无相关性。(6)CD163在OSCC组织中表达升高,在癌旁组织中表达降低(P<0.001),T3-4组CD163表达较T1-2组升高(P<0.05),淋巴结转移组组织中CD163蛋白的表达水平较无淋巴结转移组组织升高(P<0.001),III-IV期组中CD163蛋白表达较I-II期组升高(P<0.001),其余病理参数无相关性,F13A1与CD163表达呈中度相关(R=0.544,P<0.001)(7)F13A1过表达的SCC9及Cal27细胞增殖、迁移、侵袭能力上升,沉默后的细胞下降,P值均小于0.05。结论:(1)血液样本中F13A1的检测在辅助判断OSCC的发生及转移具有一定的参考价值价值;(2)F13A1蛋白可能促进OSCC无限增殖、淋巴结转移,并与巨噬细胞M2型极化相关;(3)F13A1促进SCC9和Cal27的增殖、侵袭及迁移。