空间诱变、选育枯草芽孢杆菌中性蛋白酶高产菌株研究

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枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)是一种饲用益生菌,可以促进养殖动物生长、改善水质。本论文参照《伯杰氏手册》对本实验室保存菌株BS<,2>进行生理生化试验和16SrDNA序列分析,以确定其系统发育位置。后经神舟五号宇宙飞船和第22颗返回式卫星搭载该菌种,以期诱变获得中性蛋白酶高产菌株,进而对获得的突变菌株进行分子生物学分析,希望能够确定空间环境对枯草芽孢杆菌的作用热点,以提高菌种选育的预见性及空间诱变的利用价值,在开拓空间资源,为农、渔业生产提供优良菌种等方面均具有重要的理论和实际意义。 生理生化试验和16SrDNA序列分析结果表明菌株BS<,2>为枯草芽孢杆菌。空间搭载后获得一株中性蛋白酶活性比原始菌株提高6.94倍且产酶稳定性好的菌株BSK-8。用40条10碱基随机引物对BS<,2>和BSK-8进行RAPD分析,除引物S14没有扩增出DNA片段外,每条引物扩增出1-7条不同的DNA片段,一共扩增出107条DNA片段,其中9条DNA片段显示多态性,多态性频率为8.4%,多态性引物分别为:S1(GTTTCGCTCC)、S6(TGCTCTGCCC) 、 S10(CTGCTGGGAC) 、S22(TGCCGAGCTG) 和S29(GGGTAACGCC)。 本研究首次对枯草芽孢杆菌进行重复空间诱变。研究表明对枯草芽孢杆菌重复空间诱变,可以大幅度提高中性蛋白酶酶活,提示重复空间诱变是枯草芽孢杆菌育种的一种有效手段。研究结果也证明枯草芽孢杆菌基因组DNA确实发生了突变,这也从分子生物学水平证明重复空间诱变可能成为枯草芽孢杆菌育种的有效方法。另外,研究结果也表明空间条件诱导的突变是一种多位点突变而不是单一位点突变。
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