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目的以Wistar大鼠正常脑组织为实验基础,分别给予uPA和rtPA的常用用药剂量于尾状核内注射处理,分别在溶凝时间2小时、4小时、6小时后观察脑神经形态学的影响,检测脑组织水肿、血脑屏障通透性、神经元细胞凋亡情况,旨在对临床上常用uPA和rtPA的用药剂量对正常脑组织的安全性进行初步探讨,寻找对正常脑组织影响最小的用药剂量和溶凝时间。研究方法本实验选用108只SPF级Wistar大鼠,成年雄性,体重350~400g。把Wistar实验用鼠随机分组:uPA组(给药组:I),rtPA组(给药组:II),uPA给药浓度设置为3万U/ml、5万U/ml、10万U/ml,rtPA给药浓度设置为:0.8mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml,各给药组又分为2h组、4h组、6h组,每组6只。给药组中的大鼠于尾状核注射20ul的uPA或rtPA。取出脑组织进行石蜡切片,HE染色后显微镜下观察纤溶药物对大鼠神经形态学影响,免疫组织化学技术检测脑组织水通道蛋白-4(AQP-4)、基质金属蛋白-9(MMP-9)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)及半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白的表达。内容与结果1.纤溶酶原激活剂对大鼠脑神经形态学的影响通过对比观察,uPA给药组出血少见,多存在组织水肿,但水肿程度在uPA5万U/ml、6h组得到明显改善,炎性细胞存在浸润但不明显。rtPA给药组出血情况多见,但组织水肿范围小,组织疏松情况多见,在rtPA1.5mg/ml、2h组,脑组织无出血,水肿轻,神经元细胞固缩、变性情况较其他rtPA给药组少。2.纤溶酶原激活剂对大鼠脑AQP4及MMP9蛋白表达的影响uPA给药组大鼠脑内AQP-4表达水平进行分析:(1)uPA不同给药浓度,uPA3万U/ml与uPA5万U/ml有统计学差异(P<0.05);(2)uPA不同作用时间,AQP-4表达相同;(3)不同给药浓度和不同作用时间它们之间相互作用(P<0.05),uPA5万U/ml6hAQP-4表达最低,uPA3万U/ml6hAQP-4表达最高。rtPA给药组大鼠脑内AQP-4表达水平进行分析:(1)rtPA不同给药浓度,AQP-4表达相同;(2)rtPA不同作用时间,AQP-4表达相同;(3)不同给药浓度和不同作用时间它们之间相互作用(P<0.05),rtPA2mg/ml2hAQP-4表达最低,rtPA2mg/ml6hAQP-4表达最高。uPA给药组大鼠脑内MMP-9表达水平进行分析:(1)uPA不同给药浓度,uPA3万U/ml与uPA5万U/ml有统计学差异(P<0.05);(2)uPA不同作用时间,2h与4h之间有统计学差异(P<0.05),4h与6h之间有统计学差异(P<0.05);(3)不同给药浓度和不同作用时间它们之间相互作用(P<0.05),uPA5万U/ml4hMMP-9表达最低,uPA3万U/ml6hMMP-9表达最高。rtPA给药组大鼠脑内MMP-9表达水平进行分析:(1)rtPA不同给药浓度,rtPA0.8mg/ml与rtPA1.5mg/ml有统计学差异(P<0.05),rtPA0.8mg/ml与rtPA2mg/ml有统计学差异(P<0.05);(2)rtPA不同作用时间,MMP-9表达相同;(3)不同给药浓度和不同作用时间它们之间相互作用(P<0.05),rtPA2mg/ml6hMMP-9表达最低,rtPA1.5mg/ml6hMMP-9表达最高。3.纤溶酶原激活剂对大鼠脑内细胞凋亡的影响uPA给药组大鼠脑内Bcl-2表达水平进行分析:(1)uPA不同给药浓度,Bcl-2表达相同;(2)uPA不同作用时间,2h和4h之间有统计学差异(P<0.05),4h和6h之间有统计学差异(P<0.05);(3)不同给药浓度和不同作用时间它们之间相互作用(P<0.05),uPA10万U/ml2hBcl-2表达最低,uPA5万U/ml6hBcl-2表达最高。rtPA给药组大鼠脑内Bcl-2表达水平进行分析:(1)rtPA不同给药浓度,rtPA0.8mg/ml与rtPA1.5mg/ml之间有统计学差异(P<0.05),rtPA1.5mg/ml与rtPA2mg/ml之间有统计学差异(P<0.05),rtPA0.8mg/ml与rtPA2mg/ml之间有统计学差异(P<0.05);(2)rtPA不同作用时间,2h和4h之间有统计学差异(P<0.05),4h和6h之间有统计学差异(P<0.05),2h和6h之间有统计学差异(P<0.05);(3)不同给药浓度和不同作用时间它们之间无相互作用,rtPA1.5mg/ml4hBcl-2表达最低,rtPA2mg/ml2hBcl-2表达最高。uPA给药组大鼠脑内Caspase-3表达水平进行分析:(1)uPA不同给药浓度,uPA3万U/ml与uPA5万U/ml之间有统计学差异(P<0.05),uPA3万U/ml与uPA10万U/ml之间有统计学差异(P<0.05);(2)uPA不同作用时间,Caspase-3表达相同;(3)不同给药浓度和不同作用时间它们之间相互作用(P<0.05),uPA3万U/ml6hCaspase-3表达最低,uPA10万U/ml6hCaspase-3表达最高。rtPA给药组大鼠脑内Caspase-3表达水平进行分析:(1)rtPA不同给药浓度,rtPA0.8mg/ml与rtPA1.5mg/ml之间有统计学差异(P<0.05),rtPA0.8mg/ml与rtPA2mg/ml之间有统计学差异(P<0.05);(2)rtPA不同作用时间,2h和4h之间有统计学差异(P<0.05),4h和6h之间有统计学差异(P<0.05);(3)不同给药浓度和不同作用时间它们之间相互作用(P<0.05),rtPA1.5mg/ml4hCaspase-3表达最低,rtPA0.8mg/ml2h表达Caspase-3表达最高。4.免疫组化结果综合分析综合免疫组化4个指标分析,uPA给药组中,uPA5万U/ml组对脑组织影响最小;rtPA给药组中,rtPA2mg/ml组对脑组织影响最小;同一作用时间4h时,uPA5万U/ml与rtPA2mg/ml两个药物浓度对脑组织影响最小。uPA5万U/ml4h组与rtPA2mg/ml4h组免疫组化结果综合分析,uPA5万U/ml4h组AQP-4表达与rtPA2mg/ml4h组大致相同,但是uPA5万U/ml4h组MMP9、Caspase-3表达明显低于rtPA2mg/ml4h组,Bcl-2表达明显高于rtPA2mg/ml4h组,所以uPA5万U/ml4h对脑组织影响最小。结论1.uPA给药组中,uPA5万U/ml组对脑组织影响最小;rtPA给药组中,rtPA2mg/ml组对脑组织影响最小。2.同一作用时间4h时,uPA5万U/ml与rtPA2mg/ml两个药物浓度对脑组织影响最小。3.uPA5万U/ml4h较rtPA2mg/ml4h对脑组织影响小,药品价格低廉,有更高的推广价值。