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内质网是真核生物细胞中一个重要的细胞器,参与了细胞中蛋白质的合成、修饰、折叠、组装和运输,同时也是细胞内Ca2+的重要贮存器。研究表明,内质网应激与多种疾病有关;内质网生物功能的正常发挥对细胞的存活起着重要的作用。硒是哺乳动物中的一种必需微量营养元素,在发现的25种哺乳动物硒蛋白中,有7种硒蛋白位于内质网上,分别是D2、Sep15、SelS、SelK、SelM、SelN和SelT。这些内质网硒蛋白中,除了D2的生物功能得到确定外,其他内质网硒蛋白的生物功能并不清楚,但是研究表明,这些内质网硒蛋白与内质网生物功能有着密切的关系。 为了研究这些内质网硒蛋白之间的关系,本文以HepG2细胞为对象,探究内质网硒蛋白SelS基因沉默时对其它内质网硒蛋白mRNA表达水平的影响。主要结果如下: (1)通过实验筛选,设计了两种SelS基因沉默的siRNA序列。运用MTT检测法,检测了不同浓度的SelSsiRNA对HepG细胞存活率的影响。结果发现高浓度的SelSsiRNA会对细胞产生毒性作用,致使细胞死亡。流式细胞仪定量研究了SelS和SelK基因沉默对HepG2细胞凋亡的影响,结果表明24h内的SelS和SelK基因沉默,不明显增加HepG2细胞的凋亡率。 (2)通过RT-PCR,分别检测了SelS、SelK和Derlin-1基因沉默时,内质网硒蛋白mRNA表达水平的变化。结果发现在SelS基因沉默24h后,其他内质网硒蛋白mRNA表达水平受到不同程度的下调,而且利用两种序列的SelSsiRNA转染细胞,得到类似的结果,但SelK和Derlin-1基因沉默24h后,其它内质网硒蛋白mRNA表达水平没有明显变化。通过BLAST检索SelSsiRNA序列的特异性,结果表明所设计的SelSsiRNA序列与这些硒蛋白没有任何同源性,说明SelS与其它内质网硒蛋白之间存在着某种作用,其机理有待进一步的研究。